通过双靶报告系统研究硫代修饰的单链寡核苷酸介导的基因定点修复

来源 :中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bai7691722
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该实验构建了带有两个靶基因的报告系统.其中一个靶基因为该实验室已有的缺陷型绿色荧光蛋白基因(EGFP-m,EGFP(-);另一个是通过突变野生型基因得到的缺陷型新霉素抗性基因(Neo<,r>(-)).带有这两个缺陷基因的质粒被线性化并电转到ela细胞,然后用潮霉素筛选出稳定整合的单克隆和混合克隆.我们在相同实验条件下使用分别针对两种靶基因的寡核苷酸同时转染整合后的细胞克隆,并比较两个靶基因被突变的效果.EGFP(-)的突变效果通过荧光显微镜在蛋白质水平上检测;Neo<,r>(-)的突变则通过G418筛选抗性细胞克隆进行检测.由于对两个靶基因的检测是基于不同的原理,我们通过两个靶基因突变结果的差异初步判断了硫代修饰的单链寡核苷酸对细胞分裂能力抑制的程度,以及这种修饰基团修饰的单链寡核苷酸用于基因打靶的可能性.
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