小儿退热洗剂由薄荷、金银花、连翘、大青叶、艾叶、紫苏、柴胡7味药组成,主负清热凉血解毒,辅以解表散寒,具有抑菌、抗病毒、清热等作用,临床中主要用于治疗小儿风热感冒、各种热性病、寒热往来之证。本课题依照中药新药研究指南六类中药新药要求和《医疗机构应用传统工艺配制中药制剂实施备案管理》要求,对小儿退热洗剂进行制备工艺研究、质量标准研究、药效学研究以及初步稳定性研究。1.制备工艺研究1.1提取工艺小儿退热洗剂中多数药味的挥发油与水溶性成分均为有效物质基础,先以挥发油得率为指标,采用单因素法考察各因素对挥发油得率的影响;以连翘苷含量与浸膏得率综合得分为评价指标,采用正交试验优化水提取工艺。综合挥发油与水提取工艺,最终优化提取工艺为:取处方量饮片加入10倍量的水浸泡30 min,煎煮3次,每次1h,用筛网(不少于100目)趁热过滤,合并3次滤液,同时收集挥发油。1.2成型工艺通过比较低温减压浓缩浓度前后连翘苷含量、考察不同浓度吐温-80对挥发油增溶效果以及不同灭菌条件对连翘苷含量、薄层鉴别及微生物的影响,确定成型工艺。优化后的成型工艺为:取3次合并液,低温(60±5 ℃)减压浓缩至200 ml,低速(4500 rpm)离心,取全部上清液备用。将挥发油加入至0.6%(v/v)吐温-80中搅拌均匀,缓慢加入上清液稀释,用蒸馏水定容至200 ml。灌装,采用105 ℃湿热灭菌40 min。1.3量值传递对制备过程不同环节中。结果显示在小儿退热洗剂制备过程中,提取液、浓缩液、成型制剂中连翘苷转移率分别为81.18%、74.3 8%、74.07%;成型制剂中保留了药材总挥发油29个成分中的28个成分。2.质量标准研究2.1薄层鉴别采用薄层色谱法对小儿退热洗剂中的薄荷、金银花、连翘、大青叶、艾叶、紫苏、柴胡7味药材进行定性鉴别,建立各药味薄层色谱方法学,结果表明该方法专属性强。2.1指纹图谱及多指标含量测定采用高效液相色谱法建立了 11批小儿退热洗剂HPLC指纹图谱,1 1批制剂相似度均大于0.96,共匹配出共有峰29个,指认出13个成分。在指纹图谱基础上,选出7个咖啡酰基奎宁酸类成分(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C)、迷迭香酸以及连翘苷9个成分作为多指标含测指标性成分。指纹图谱及多指标含量测定方法学均符合要求,表明本实验建立的指纹图谱及多指标含量测定方法准确、可行,可用于小儿退热洗剂质量控制。对11批小试样品进行多指标含测,并在此基础上建了立小儿退热洗剂质量标准草案。3.药效学研究采用大鼠干酵母发热模型探究小儿退热洗剂解热作用,结果显示:低中高剂量小儿退热洗剂组给药1h后即可将体温降至正常体温以下,退热迅速,给药2h后体温回升至略高于正常体温水平并保持稳定;而阿司匹林组则需2h将体温降至正常体温附近,继而持续将体温降至正常体温以下。与发热模型组相比,低中高剂量组及阿司匹林组在给药5h内各时间内体温均有显著(p<0.05)或极显著(p<0.01)差异,给药5h后体温反应指数相应减小。小儿退热洗剂可改善发热病势,减缓发热持续进程。4.初步稳定性对制剂进行了3个月的加速稳定性考察。结果显示在3个月内的加速试验过程中,制剂中总咖啡酰基奎宁酸、迷迭香酸、连翘苷含量、薄层鉴别等项均未见明显变化,3个月内的加速稳定性良好,表明小儿退热洗剂工艺设计合理、制剂稳定、质量可控。