小反刍兽疫（Peste des petits ruminants，PPR）是山羊和绵羊高度易感的病毒病，因其传播速度快、死亡率高，被OIE确定为必须报告的动物传染病。该病主要用弱毒疫苗免疫预防，但由于因其热稳定性不好，常导致免疫失败，且弱毒疫苗存在生物安全隐患，因此，PPR疫苗安全性和稳定性的改进提高是当前疫苗研制的重点。本研究在对PPRV及其同属病毒序列同源性分析的基础上，对其6种结构蛋白进行了结构预测，克隆、表达了PPRV的P、N、L基因，构建了其全长cDNA，最终制备了PPRV的DNA疫苗并进行了免疫原性分析，获得以下结果：1.对麻疹病毒属所有成员全基因组序列同源性进行了分析并构建了进化树，明确麻疹病毒属各成员间序列相似性在64%以上，在基因组的5′端和3′端相似性极高，几乎为100%；在进化树上，CDV和DMV位于同一支，亲缘关系较近；MV和RPV位于同一支，亲缘关系比较近；PPRV则自居单独的一支。利用Swiss-Modle和堪萨斯大学的I-TASSER运算服务器，预测了结构蛋白的三维结构。2.构建了P蛋白基因原核表达载体pET30/P；确定了P蛋白原核表达的最佳条件，批量诱导表达后以镍亲和层析柱纯化P重组蛋白，然后免疫小鼠制备了多克隆抗体，其滴度高达1:25600；3.构建了P、N和L基因真核表达载体pcDNA3.1/P、pcDNA3.1/N和pcDNA3.1/L并分别转染Vero细胞，间接免疫荧光、SDS-PAGE、WB均证实P、N和L蛋白均得以高效表达。4.构建了L基因的原核分段表达载体pET30/L1-L4和真核表达载体，以镍亲和层析柱纯化的重组蛋白免疫小鼠，制备了多克隆抗体，其滴度高达1:25600；5.利用RT-PCR方法分5段扩增了PPRV全基因组cDNA，将扩增片段依次连接后获得了PPRV全长基因的cDNA克隆pOK12-PPRV；然后在全长基因组cDNA的5′末端引入了核酶序列、真核启动子，3′末端引入了HDV序列和终止子序列，序列测定和比对分析表明，首次成功构建了Nigeria75/1株全长cDNA，为拯救PPRV奠定了坚实的基础。6.将25只6月龄的山羊随机分成5组，分别免疫DNA疫苗（pcDNA3.1/N、pcDNA3.1/P、pcDNA3.1/L和pOK12-PPRV四质粒）、三质粒（pcDNA3.1/N、pcDNA3.1/P和pcDNA3.1/L）、pOK12-PPRV质粒、弱毒疫苗和PBS，通过对免疫动物抗体、细胞因子、T细胞增殖、CD4+/CD8+T细胞比值和中和抗体等指标测定结果表明，首免后的第三周和二免后的第二周，DNA疫苗能够诱导机体的上述指标发生明显变化，其中中和抗体在二免后可达1:32，说明DNA疫苗和弱毒疫苗一样能够诱导山羊产生特异性的体液免疫和细胞免疫，该研究为PPR新型疫苗的研制提供了新的思路和方向。