【摘 要】
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本文对黑附球菌YL01产胞外黄色素发酵条件进行了优化,并对胞外黄色素的合成途径、纯化和理化性质做了初步的研究。通过单因素和响应面试验优化,获得了培养基配比为:1.646%甘油,0.2%酵母粉,0.05%氯化锌,pH自然,种子培养基和发酵培养基均采用该配比;摇床培养条件为:温度23.05℃,时间12d,转速150r/min,装液量95.1mL/250m L。此方法可获得较高产量的胞外黄色素,色价达1
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本文对黑附球菌YL01产胞外黄色素发酵条件进行了优化,并对胞外黄色素的合成途径、纯化和理化性质做了初步的研究。通过单因素和响应面试验优化,获得了培养基配比为:1.646%甘油,0.2%酵母粉,0.05%氯化锌,pH自然,种子培养基和发酵培养基均采用该配比;摇床培养条件为:温度23.05℃,时间12d,转速150r/min,装液量95.1mL/250m L。此方法可获得较高产量的胞外黄色素,色价达16.646U/m L。通过酶抑制法和前体添加法初步确定了黑附球菌YL01产黄色素的合成途径为莽草酸途径。抑制剂三甲胺为12mmol/L时,黄色素产量降低了80.24%;前体物质促进剂酪氨酸为6mmol/L时黄色素产量较对照增加了88.90%,苯丙氨酸为3mmol/L时黄色素产量较对照增加了107.83%。对黑附球菌YL01黄色素的分离纯化条件进行优化。通过有机溶剂萃取正丁醇效果较好,发酵液与正丁醇比例2:3,共萃取3次;选择硅胶粉作为层析柱材料,以乙酸乙酯,乙醇,水作为流动相分离纯化黄色素。经过HPLC检测分离后黄色素纯度为80.15%。黑附球菌YL01黄色素具有酯类、芳香胺类及三萜类化合物的结构。对黄色素的稳定性进行分析。避光保存36h时,黄色素的保存率为96.69%;累计照射太阳光36h时,黄色素的保存率为76.61%。在pH为1,7,13的环境中保存48h时,黄色素的保存率分别为19.17%,94.53%,98.69%;在碱性条件下有增色效果,当pH小于7时褪色明显。黄色素在10和90℃下保存300min,其保存率分别为99.40%和85.52%。在Ca2+、Zn2+、Mn2+和K+中稳定性较好,在Fe2+和Fe3+中容易被破坏;在强氧化剂和还原剂中的稳定性差。
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