【摘 要】
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从土壤中筛选获得一株高产α-淀粉酶真菌菌株FS528,产酶水平为2017.3U/mL。对该菌株进行形态学初步鉴定,为典型的曲霉属菌种。提取FS528的18S rDNA,并进行测序,将测序结果与
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从土壤中筛选获得一株高产α-淀粉酶真菌菌株FS528,产酶水平为2017.3U/mL。对该菌株进行形态学初步鉴定,为典型的曲霉属菌种。提取FS528的18S rDNA,并进行测序,将测序结果与曲霉属已知菌种18S rDNA序列进行比对,构建进化树,最终确定该菌株为米曲霉（Aspergillus oryzae）。研究米曲霉原生质体制备与再生的最佳条件为:菌丝培养时间为14h,采用1%溶菌酶+0.5%蜗牛酶+1%纤维素酶的复合酶解液,选用0.6mol/L的NaCl为渗透压稳定剂,在pH5.0（磷酸盐缓冲液）,30℃的条件下,酶解处理2.5h。采用PDA为基础再生培养基,0.6mol/L的NaCl做为高渗稳定剂,能够使原生质体的再生率达到30%。选用出发菌株Aspergillus oryzae FS528,FS179,利用基因组改组技术选育米曲霉α-淀粉酶高产菌株。分别制备FS528,FS179原生质体,利用双亲灭活标记法,原生质体融合条件为:pH 6.0、PEG 30%、Ca2+0.02mol/L、融合处理20min。采用平板透明圈法,液体发酵对两轮基因组改组得到的600个融合子进行筛选,获得产菌水平最高的4菌株F2-10,F2-14,F2-15,F2-16。其中F2-14产酶水平达到4233.4U/mL,比出发菌株提高了52.34%,连续传代培养与发酵结果表明该菌株具备较好的遗传稳定性,初步实现了选育目的。通过对改组前后的菌株的形态学观察,改组后菌株在生长速度,产孢数量上都比出发菌株有了较大的改善。RAPD分析表明:改组菌株的遗传组成与原始菌株相比较存在差异。
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