目的:肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是原发性肝癌的最常见的一种分型,在我国也是最常见的肿瘤之一,其发病率在世界肿瘤发病率中排在第三位,是世界癌症相关死亡的主要原因[1]。肝细胞肝癌的发展较快且易转移,并且晚期肝癌较难治愈。因此了解肝细胞肝癌发生发展的分子生物学机制有助于早期诊断和肿瘤分型,同时也有助于找到新型的治疗方法。PAK3（p21-Activated kinases 3）是PAK家族的成员之一,它是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,受Rac、Cdc42和GTPases的刺激,在一定条件下与其激活形式结合[2]。最近的研究表明,在肿瘤的发病过程中,PAK3的异常表达和激活可以作为肿瘤的增强因子,通过促进特定的信号通路可以影响胃癌和胰腺癌等癌症的发生发展[3-4],但PAK3与肝细胞肝癌的关系尚未报道。上皮细胞间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）是一个多步骤的生物学过程,主要发生在胚胎形态发生期间,目前多在纤维化和癌症中被关注[5]。在癌症进展过程中,细胞由于失去了E-钙黏蛋白（E-cadherin）进而失去了细胞与细胞的接触,并获得了向周围或远处组织扩散的运动能力进而促进了癌症的侵袭和转移。这在转移的早期阶段起着至关重要的作用[6]。TGF-β信号通路的增加是EMT在癌症进展和转移中的关键通路。Smads是TGF-β信号的下游蛋白,在调控转录和控制细胞增殖和分化中发挥的重要作用。Smads的磷酸化可以实现从抗瘤性到致瘤性的转变[7]。方法:本论文首先从细胞实验确定PAK3在肝细胞癌中的角色,随后对PAK3在肝癌中的功能、作用方式及作用机制进行了研究:组织水平:首先应用Western blot、q RT-PCR和免疫组化三种实验方法检测蛋白激酶PAK3在肝细胞癌组织中的表达水平。细胞水平:接下来从细胞水平对PAK3进行检测,RT-PCR、Western blot检测蛋白激酶PAK3在四种肝癌细胞系（Hep G2、Huh7、Hep3B、Hcclm3）中的表达情况。我们又通过功能实验CCK8增殖实验、划痕实验、transwell实验对PAK3的功能进行研究。动物水平:构建了过表达PAK3的稳转细胞株后,对小鼠进行尾静脉注射。分子机制的研究:我们在肝癌细胞中表达PAK3,应用Western blot、免疫荧光对EMT及其相关通路进行了检测。结果:结果显示蛋白激酶PAK3在肝癌组织及肝癌细胞中的表达高于在正常组织中的表达,因此可以说明蛋白激酶PAK3在肝细胞癌组织中高表达。功能实验中,CCK8细胞增殖实验证明,PAK3的过表达促进了肝癌细胞的增殖。而划痕实验、Transwell侵袭小室实验显示,过表达PAK3可以促进肝癌细胞的迁移和侵袭功能,因此,可以看出PAK3具有促进肝癌细胞的生长、转移和侵袭功能。与对照组相比,高表达PAK3后促进了成瘤性同时使肺转移结节数量增多。证明PAK3对HCC的增殖和转移有促进的作用。为了研究PAK3作用的具体机制,我们使用GSEA找到PAK3促进肝细胞癌的发生发展是由于促进了上皮间质转化。实验结果显示PAK3的过表达影响了EMT相关标志物以及转录因子的表达,证明PAK3促进肝癌细胞的增殖和转移与EMT相关。免疫荧光共聚焦检测结果也证明了此观点。TGF-β是EMT的主要通路。我们继续应用Western blot对通路相关分子进行检测。结果显示PAK3的过表达可以增强TGF-β通路中磷酸化smad2、磷酸化smad3的表达,因此我们推测PAK3通过激活TGF-β/smad通路促进EMT,进而影响肝癌细胞的侵袭和转移。结论:本研究发现了尚未报道过的PAK3与HCC的关系。PAK3在肝细胞癌中高表达。随后我们利用细胞生物学实验验证了PAK3的功能,PAK3可以促进肝癌的增殖、迁移和侵袭,促进肝癌细胞中的上皮间质转化。进一步的分子实验发现PAK3可以促进TGF-β/smad通路中磷酸化smad2、磷酸化smad3的表达,最终促进肝癌细胞的生长及转移。为防治肝细胞肝癌的侵袭转移提供了新的靶点。