四川泡菜中嗜盐微生物的分离与鉴定

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本文通过菌落形态特征、SSU rRNA(16S rRNA、18S rRNA)、ISR(26S rRNA D1/D2区系统发育、16S-23S rRNA ISR区间分析)和脂肪酸分析等分离鉴定四川泡菜盐卤中的嗜盐微生物,为解析盐卤中嗜盐菌在四川泡菜发酵过程中的生物学过程和四川泡菜风味的形成机理提供了前期基础。是广泛应用于所有生物进化关系研究的分子标识。从四川泡菜盐卤中分离获得54株嗜盐细菌。所有分离菌株皆为革兰氏阳性菌,其中ZQ1和ZQ4最适NaCl生长浓度为7%(w/v),ZQ26最适NaCl生长浓度为12%(w/v)。其余51株菌的NaCl生长浓度范围为0%-20%(w/v),最适生长浓度6%(w/v),不产生吲哚,酪素水解、明胶液化、淀粉水解和马尿酸水解为阴性,过氧化氢酶和脂酶为阴性。16S rRNA序列分析表明:54株菌分别属于细菌域的Virgibacillus,Staphylococcus和Oceanobacillus属。菌株ZQ1、ZQ4与Virgibacillus halodenitrificans的16S rRNA基因序列相似性为99%;菌株ZQ26与Staphylococcus cohnii的相似性为99%,其余菌株与Oceanobacillus oncorhynchi在16S rRNA水平上相似性为98%-99%。作为优势菌的O.oncorhynchi在16S-23S rRNA ISR水平的分析进一步表明:51株O. oncorhynchi被分成五个亚类,这五个亚类的代表菌株ZQ30、ZQ35、ZQ36、ZQ42和ZQ52的全细胞脂肪酸的种类和含量皆存在差异。这一结果暗示了盐卤中的O. oncorhynchi菌在种内水平上已经发生了分化。从四川泡菜盐卤中分离获得34株嗜盐酵母菌。分离菌最适生长温度为25-28℃,NaCl生长范围为0%-12%(w/v),具膜,有假菌丝,产生子囊,不产生淀粉,尿素水解、醋酸产生、重氮基蓝B(DBB)为阴性,脲酶为阴性。18S rRNA序列分析表明:34株菌属于Pichia属,分离菌株的18S rRNA序列与Pichia manshurica的18S rRNA序列相似性达到99.22%以上。分离菌株的26S rRNA D1/D2区序列与P. manshurica的26SrRNA D1/D2区序列相似性达到99.90%以上,进一步证实了分离菌株为毕赤酵母属P.manshurica。而代表菌株P42、P43、P45、P5和P55菌株在脂肪酸种类和含量上均有差异。这一结果暗示了盐卤中的P. manshurica菌在种内水平上已经发生了分化。
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