牛病毒性腹泻病（Bovine viral diarrhea,BVD）是一种在牛之间传播的高度接触性传染病,引起该疾病的病原是牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）。BVDV的基因型与基因亚型众多,不同基因型或亚型毒株感染牛后所表现的临床症状有所差异,共有症状为腹泻、发热和呼吸道症状。近些年,BVD在中国境内乃至于全世界范围内广泛流行,造成的经济损失巨大。由于BVDV基因组的特殊性,在传播过程中极易发生变异,其中又以E2蛋白变异系数最高,同时该蛋白由于其良好的免疫原性与抗原性,是疫苗研发的主要突破口。E2蛋白的这种性质为疫苗的成功研发带来了极大的挑战。该病导致规模化养牛业持续健康发展受阻,因此掌握BVDV的全基因序列对疫苗研发与BVD防控意义重大。该实验于河南某地区的牛场采集200份牛血清,通过血清抗原阳性率调查得到该地区的BVD流行情况;并于病死牛脾脏中分离到一株BVDV毒株,进行基因型鉴定、全基因序列测定及生物型、TCID50的鉴定等试验。根据血清学阳性率鉴定结果所得的数据制定合理的防控措施,分离株全基因组序列的测定,为疫苗的研究及反向遗传工作提供基础生物信息,使用生物信息分析软件得到分离株核苷酸序列同源性与E2蛋白的一级氨基酸序列,并将分离毒株E2蛋白的一级氨基酸序列与同源性最高的SD1303毒株和同源性最低的SD15毒株的E2蛋白氨基酸序列进行比较。2019年河南4个规模化牛场200份牛血清进行BVDV的RT-PCR检测,阳性率为17.5%;采集感染BVDV而死亡牛的脾脏,经处理后获得上清液,鉴定脾脏中所含的毒株的基因型,鉴定结果为BVDVⅡ型,将该毒株命名为BVDV HEN01毒株;通过细胞培养,与对照组SM毒株相比,BVDV-HEN01毒株接种的MDBK细胞未发生细胞病变;对照组SM毒株接种的细胞出现拉网、堆积等细胞病变现象;空白组细胞生长正常,根据试验结果可判定该毒株为非致细胞病变型（NCPE）;设计该毒株的全基因扩增引物,扩增后的PCR产物胶回收纯化获得目的片段,将目的片段连接至pMD-18T载体,转化至DH5α大肠杆菌感受态,经増菌培养后鉴定并提取质粒测序,将测序结果进行拼接后获得全基因组序列,间接免疫荧光法测得病毒的TCID50为10^-4.1,使用电镜观察细胞培养物内病毒颗粒,得出病毒颗粒的直径约为50 nm。依据测得的全基因序列的基础生物学信息成功预测了E2蛋白的结构。