胚胎干细胞的分离和培养

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目的:探讨不同饲养层细胞对小鼠胚胎干细胞和兔囊胚内细胞团生长的支持能力,选择最佳的饲养层细胞培养和分离胚胎干细胞.方法:分别用成系小鼠胚胎成纤维细胞(SNL)、兔胚胎成纤维细胞(REF)和兔肾脏成纤维细胞(RRF)作为饲养层饲养小鼠胚胎干细胞和兔囊胚,观察它们的生长状态,并进行免疫组化染色.结果生长在兔胚胎成纤维细胞的小鼠胚胎干细胞较生长在SNL和RRF饲养层细胞上的具有最显著的未分化形态,保持未分化时间最长,免疫组化染色阳性程度最强.在兔胚胎成纤维细胞上呈聚集生长的兔囊胚内细胞团的比例最高.未能得到兔胚胎干细胞系.结论:兔胚胎成纤维细胞可以做为胚胎干细胞的饲养层细胞;兔胚胎成纤维细胞最能维持小鼠胚胎干细胞的未分化状态及促进兔囊胚内细胞团的聚集生长.兔胚胎干细胞建系的条件还需进一步探索.
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