白杨素增强TRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性作用的研究

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目的研究白杨素是否通过抑制NF-kapppaB活性增强TRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性作用。方法体外培养人胃癌SGC-7901细胞和人胃黏膜GES-1细胞。MTT比色法测定细胞活性。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析细胞凋亡程度。DNA琼脂糖凝胶电泳确证诱导细胞凋亡作用。Western Blot检测细胞NF-kappaB(p65)蛋白和磷酸化IκBα蛋白表达。结果MTT比色测定结果显示:单独应用白杨素或TRAIL作用48小时对人胃癌SGC-7901细胞增殖活性抑制作用的半数抑制浓度(IC50值)分别为134μmol/L和402ng/mL,然而,用40μmol/L的白杨素预孵育30分钟后,再加入TRAIL处理48小时,IC50值为47ng/mL,合并用药效应的CI值是0.4676;单独应用白杨素和TRAIL作用48小时或者用40μmol/L的白杨素预孵育30分钟后,再加入TRAIL处理48小时,对永生化二倍体人胃粘膜GES-1细胞增殖活性抑制的IC50值分别为747μmol/L、1348ng/mL和845ng/mL,合并用药效应的CI值是1.7579。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析结果表明:单独应用白杨素40μmol/L或TRAIL100ng/mL作48小时,亚二倍体DNA含量细胞百分率分别为4.65%±0.58%和3.60%±0.16%;但是,用40μmol/L的白杨素预孵育30分钟后,再加入100 ng/mL的TRAIL处理48小时,亚二倍体DNA含量细胞百分率为49.87%±4.27%;单独应用白杨素40μmol/L和TRAIL100ng/mL作用48小时,或者用40μmol/L的白杨素预孵育30分钟后,再加入100 ng/mL的TRAIL处理48小时,永生化二倍体人胃粘膜GES-1细胞的亚二倍体DNA含量细胞百分率分别为3.09%±0.24%、4.11%±0.22%和4.34%±0.095%,与溶媒组(2.19%±0.06%)比较差异无统计学显著性意义。DNA琼脂糖凝胶电泳显示:用40μmol/L的白杨素预孵育30分钟后,再加入100ng/mL的TRAIL处理人胃癌SGC-7901细胞48小时,展示出典型DNA梯形条带图谱。Western Blot分析结果发现:白杨素以浓度和时间依赖的方式抑制SGC-7901细胞NF-κB(p65)蛋白表达;并以浓度和时间依赖的方式下降SGC-7901细胞IκBα蛋白磷酸化水平。结论1.亚细胞毒性浓度的白杨素具有增强TRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性作用。2.亚细胞毒性浓度的白杨素增强TRAIL对人胃癌SGC-7901细胞毒性作用的机制与降低细胞IκBα蛋白磷酸化水平和抑制NF-κB(p65)蛋白表达有关。
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