论文部分内容阅读
黑素瘤是起源于表皮黑素细胞的高度恶性肿瘤，转移性强，发展迅速，愈后差，死亡率高。研究发现其发病与遗传因素密切相关，其中位于RAS-RAF-MEK-ERK途径的BRAF基因成为当前黑素瘤分子靶向治疗研究的热点基因。目的：分析黑素瘤BRAF拷贝数增加与BRAF突变、蛋白表达之间的关系，进一步探讨BRAF在黑素瘤中的作用机制。研究新疆地区黑素瘤BRAFV600E突变蛋白质表达情况，并进行不同民族对比性研究。分析免疫组化检测黑素瘤中BRAFV600E突变的敏感性和特异性，为VE1的临床应用提供理论依据，指导黑素瘤患者选择分子靶向治疗药物。方法：第一部分整理分析新疆维吾尔自治区人民医院2004-2011年黑素瘤患者临床病理资料，选取本实验组前期经PCR扩增BRAF突变DNA检测发生BRAF突变的黑素瘤组织标本19例和免疫组化方法检测braf蛋白表达阳性病例20例，共30例黑素瘤患者存档石蜡组织。色素痣石蜡标本10例。用FISH即荧光原位杂交技术检测标本中BRAF基因扩增情况，分析BRAF基因扩增与BRAF表达、BRAF突变之间的关系。第二部分选取2004-2013年新疆维吾尔自治区人民医院经病理确诊的103例黑素瘤石蜡包埋组织，并整理分析临床病理资料，另40例色素痣的石蜡包埋组织作为对照。运用免疫组化方法检测BRAF V600E突变蛋白在黑素瘤织及色素痣组织中表达情况。应用SPSS17.0软件，采用X2检验统计分析BRAFV600E突变蛋白表达与患者临床表型各因素的关系，以P<0.05有统计学意义。结果：1）30例黑素瘤和10例色素痣组织进行FISH检测，结果显示黑素瘤中共5例发生BRAF拷贝数增加其中2例BRAF扩增,3例7号染色体多倍体。色素痣中没有检测到BRAF拷贝数增加。2）BRAFV600E突变蛋白阳性表达率在皮肤黑素瘤中为20.4%（21/103），色素痣中为5.0%（2/40），差异有统计学意义（X2=5.055，P<0.05）。3）黑素瘤BRAFV600E突变蛋白的表达水平与年龄、民族、发病部位、CLARK分级有关，差异有统计学意义（P<0.05）。与性别、有无淋巴结转移无明显相关性（P＞0.05）。4）免疫组化检测恶性黑色素瘤中BRAFV600E突变敏感性为100%(15/15)，特异性为98.5%(65/66)。结论：1）BRAF拷贝数增加可能代表另一种BRAF激活机制，常常伴随BRAF V600E突变；7号染色体的多倍体是BRAF扩增和BRAF蛋白表达增加的一种机制。2）BRAFV600E突变特异性抗体的临床应用是对传统突变检测的一种有价值的补充，可以作为临床筛选BRAFV600E突变状态的工具。