论文部分内容阅读
白血病是一类常见的严重威胁人类健康的造血系统恶性肿瘤。目前，化疗和造血干细胞移植是治疗白血病的主要手段，但是，通过化疗只能取得短暂缓解，而异基因造血干细胞移植治疗白血病5年无病生存率仅为35％—50％。此外，因造血干细胞供体限制，只有部分患者能进行这一治疗，而且还存在移植相关死亡和复发危险性。因此，寻找新的更有效抗白血病药物仍然十分迫切和需要。氯原酸是一种提取自中草药的物质，具有广泛的生物学效应，氯原酸钠是一种氯原酸和钠盐的半合成小分子化合物，近期有研究显示氯原酸可以诱导包括Bcr-Abl阳性的慢性粒细胞白血病（CML）原代细胞在内的Bcr-Abl阳性细胞的凋亡，而对Bcr-Abl阴性的细胞无明显作用。另外，我们前期的研究工作已经证实，钙离子通道阻止剂小檗胺能选择性诱导Bcr-Abl阳性的人白血病细胞系K562和原代白血病细胞凋亡，而对正常骨髓造血细胞毒性很少。基于此，我们采用人白血病细胞系KG1、K562和Jurkat，以适当浓度的氯原酸作用于各细胞系，观察氯原酸对各株白血病细胞的增殖抑制作用。并将氯原酸和小檗胺联合作用于K562细胞，比较药物联合作用和各自单独作用对细胞的增殖抑制作用。对象与方法一、研究对象人白血病细胞系：KG1、K562和Jurkat三株细胞系，其中KG1为急性原始粒细胞白血病细胞系，K562为慢性粒细胞白血病细胞系，Jurkat为急性淋巴细胞白血病细胞系（ALL）。均为本实验室常规培养。二、研究方法1．细胞接种：采用处于对数生长期的细胞，按细胞密度8×103／孔分别加入96孔细胞培养板中。2．药物作用：每孔分别加入梯度浓度的药物，Na-氯原酸和（或）小檗胺，不加药物为阴性对照，每组设3个平行孔。37℃，5％CO2，饱和湿度下培养48小时。3．MTT作用：每孔加入20μlMTT，继续培养4小时。4．测吸光度：离心，弃上清，每孔加入200μl二甲基亚枫，水平摇床振荡5分钟，用全自动酶标光度计在470nm处测吸光度。5．在计算机中使用Microsoft Office Excel计算抑制率及50％细胞生长抑制浓度，并以药物浓度为横坐标，活细胞数为纵坐标作图，观察药物对细胞增殖抑制的情况。结果-20℃保存的不同浓度的氯原酸钠对K562细胞有明显的增殖抑制作用，其作用强度呈现浓度依赖性，48小时的50％细胞生长抑制浓度（IC50）值为24.210μg／ml，但是对KG1、Jurkat均无明显得增殖抑制作用。4℃保存的不同浓度的氯原酸钠对K562细胞具有更强的增殖抑制作用，48小时的IC50值为13.177μg／ml，同时对Jurkat细胞也有较明显的增殖抑制作用，48小时的IC50值为13.177μg／ml，作用强度呈现浓度依赖性，但对KG1细胞仍无作用。小檗胺单独作用对K562细胞有明显的增殖抑制作用，其作用强度呈现浓度依赖性。48小时的IC50值为6.080μg／ml。13μg／ml（IC50）的氯原酸钠与不同浓度的小檗胺联合作用对K562细胞的增殖抑制作用略强于小檗胺单独作用于K562细胞。6μg／ml（IC50）的小檗胺与不同浓度的氯原酸钠联合作用对K562细胞的增殖抑制作用明显强于氯原酸钠单独作用于K562细胞。结论1．-20℃避光保存的氯原酸钠可以选择性抑制bcr-abl阳性的CML细胞系K562细胞的增殖。2．4℃保存的氯原酸钠对bcr-abl阳性的CML细胞系K562的增殖抑制作用增强，并且对bcr-abl阴性的Jurkat细胞亦具有增殖抑制作用。3．氯原酸钠与小檗胺具有协同抑制CML白血病细胞K562增殖的作用。