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目的仙台病毒（Sendai Virus,Se V）可引起啮齿类动物呼吸道疾病,使免疫系统受到影响,是啮齿类实验动物必检项目。Se V检测的国家标准颁布时间较早,随着检测技术的更新与发展,应对国家标准进行修订与补充。鉴于此,本研究以Se V的L基因为靶基因,建立快速、特异、敏感的Taq Man-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法（Taq Man q RT-PCR）;同时使用血凝素神经氨酸酶（hemagglutinin-neuramindase,HN）和融合蛋白（fusion protein,F）作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法,并对两种包被抗原的ELISA方法进行比较,筛选出敏感性较好的检测方法,用于血清学检测。通过从分子水平定量实时检测方法和血清学抗体检测方法的研究及比较分析,为Se V的实验室研究和日常监测提供物质储备,并对未来国家标准的修订提供理论支持。方法根据Gen Bank中Se V基因的保守区段（8556-15242）序列,设计了1对特异性引物与1条Taq Man探针,利用L基因重组标准质粒建立标准曲线、优化反应条件,建立Taq Man-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法,并对其特异性、敏感性与重复性进行评估。与此同时,根据已发表的Se V基因序列（Gen Bank:NC001552.1）中的F和HN基因片段进行优化合成,并克隆入p GEX-6p-1原核表达载体构建重组质粒p GEX-6P-1-Sev-F和p GEX-6P-1-Sev-HN,并转化到大肠杆菌BL21（DE3）,进行诱导表达及纯化。分别利用纯化的r F蛋白和r HN蛋白作为包被抗原,对包被浓度、血清稀释倍数、酶标二抗稀释倍数等条件进行优化,并确定阴阳临界值,分别建立r F和r HN作为包被抗原的间接ELISA方法。通过特异性试验、重复性试验和敏感性试验对建立的两种ELISA方法进行验证、比较分析。用灭活的Se V免疫小鼠,分别于免疫后的3、5、7、9、11天采血,用所建立的两种ELISA方法进行检测。对结果进行分析,比较两种方法的检测效果。选择效果好的一种与PCR同时对60份临床样品进行检测,验证其检测效果。结果通过对Taq Man-MGB探针荧光定量RT-PCR检测反应体系进行优化,获得最佳反应体系为20μmol/L;终引物和探针终浓度分别为10μmol/L和15μmol/L;反应程序为94℃预变性30 s,94℃5s,54℃退火温度30s,40个循环。在特异性试验中,除Se V扩增出现特异性曲线外,其他鼠类常见病毒均未出现特异性曲线;在敏感性试验中,Sev最低检测限为5.29×101拷贝/μL。在重复性试验中,其批内变异系数为0.44%-0.77%,批间变异系数为0.44%-1.03%。通过对60例临床样本进行检测,本实验建立的方法检出阳性9例,常规RT-PCR方法检出阳性7例,高于常规RT-PCR方法,说明本实验建立的方法更敏感,可以用于监测Se V的早期流行。与此同时,在Sev的间接ELISA检测方法研究中,通过原核表达、获得用于包被抗原的重组蛋白r F和r HN,利用这两种包被蛋白建立间接ELISA检测方法检测小鼠血清,通过对各项条件进行优化,结果显示,所建立的间接ELISA方法r HN蛋白的最适包被浓度为4μg/ml,r F蛋白的最适包被浓度为8μg/ml,阴阳血清的最佳稀释度均为1:200,酶标二抗最佳稀释度均为1:4000;r HN与r F两种不同重组蛋白检测方法的阴阳临界值分别为0.276、0.307。特异性实验表明均只能与Se V阳性血清发生特异性反应,不与其他小鼠病毒阳性血清和健康小鼠血清发生交叉反应,纯化GST作为包被抗原进行检测结果均为阴性,说明建立的两种检测方法均有较好的抗原特异性。对Se V阳性血清进行稀释,HN蛋白检测方法敏感性达到1:6400,优于F蛋白检测方法的1:3200。在重复性试验中,r HN批内的变异系数在1.5%-4.3%之间、批间的变异系数在1.1%-3.9%之间,r F批内的变异系数在4.9%-7.1%之间、批间的变异系数在1.1%-3.2%之间。用灭活的仙台病毒免疫小鼠,进行抗体水平检测,分别于免疫后的3、5、7、9、11天采血,用所建立的两种ELISA方法进行检测,在第3天r HN与r F蛋白检测方法均检测出了阳性。用r HN检测方法和PCR方法同时对60份临床样品进行了检测,阳性符合率为86%,阴性符合率为98%,总符合率为96.7%。结论1、建立的Se V Taq Man-MGB探针荧光定量RT-PCR检测方法具有敏感性高、特异性强、良好的重复性等优点,适用于Se V实验室检测、研究。2、用两种包被抗原建立的间接ELISA方法均具有较好的特异性、敏感性和重复性,其中r HN作为包被抗原建立的ELISA方法敏感性和重复性更好,可用于Se V的快速诊断及实验动物生产中大规模日常检测。