论文部分内容阅读
细茎石斛(Dendrobium moniliforme(L.)Sw.)为多年生草本植物,其花姿态优美,气味芳香,具备观赏价值；其茎能滋阴清热、生津益胃、止咳润肺,具有极高的药用价值。因此,细茎石斛具有广阔的开发前景。本研究以采自湖北省英山县的细茎石斛为实验材料,研究细茎石斛壮苗的最佳培养基；同时分离细茎石斛相关细菌并对其多样性和促生拮抗活性展开研究,以期为细茎石斛种质保存提供优良的快繁方案并筛选出具有优良促生潜力和拮抗病原真菌活性的菌株,为细茎石斛GAP种植奠定基础。在细茎石斛组织培养壮苗阶段的研究方面,实验选取湖北省英山县细茎石斛种子萌发形成的幼苗作为实验材料,研究不同激素配比,不同培养基添加物对幼苗生长的影响。结果发现：6-BA和NAA配合使用能够促进细茎石斛幼苗的生长,当激素配比为0.5mg/L NAA+0.6mg/L6-BA时幼苗的长度、叶宽和颜色都达到最佳,椰子汁和土豆浸出液可以明显促进石斛幼叶的伸长与加宽,使幼苗叶色浓绿。在细茎石斛相关细菌多样性研究部分,采集细茎石斛根围土壤,根围苔藓和完整的细茎石斛植株,从细茎石斛体内、根围苔藓和根围土壤中分离得到75株细茎石斛细菌,细茎石斛内生细菌21株,根围苔藓内生细菌14株,根围土壤细菌40株。以这75株细菌为实验对象,通过测定这些菌株解磷、解钾、固氮、产生长素IAA和产嗜铁素的能力,分析其具备的促生潜力和相关特性。结果显示有33株细菌能溶解有机磷,39株细菌能溶解无机磷,23个菌株能同时溶解有机磷和无机磷；64株细菌能产生长素IAA,39株细菌能够产嗜铁素,12株细菌具有固氮能力,25株细菌具有解钾能力。我们又使用特异性引物扩增具有固氮能力细菌的nifH基因,对菌株进行特异性分析。随后,我们对参试细菌进行了ARDRA分析,ARDRA结果表明在相似度80%的条件下,75个菌株被划分成33簇；经过16S rRNA基因测序和比对,这些菌属于8个菌属,分别是Streptomyces,Bacillus,Pseudomonas,Rahnella,Pandoraea, Microbacterium,Lysinibacillus和Pantoea。在这些细菌中,芽孢杆菌(Bacillus)和假单胞菌(Pseudomonas)是优势种。此外,本研究在33个ARDRA簇中各选取了1个代表菌株,与6株常见植物病原菌进行拮抗实验,结果表明：菌株DmBR2、DmB10、DmB6和DmB9对6株病原真菌均具有拮抗活性,菌株DmB6拮抗效果最为明显；在几丁质酶、蛋白酶和纤维素酶活性测定实验中,这4株细菌菌表现出较高的产酶活性。在后续实验中,可以筛选优良菌株应用于植物病害防治,达到环保的目的。