【摘 要】
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在我国,莲藕被广泛种植,是极其丰富的食药用植物资源。莲藕渣是莲藕加工中的下脚料,绝大部分被丢弃,造成资源浪费。莲藕渣多糖(Lotus root residue polysaccharide,LRP)是莲藕渣中主要活性成分之一,前期研究表明其具有抗氧化、降血糖、止血、抗病毒和免疫调节等多种生物活性。本论文采用16S r DNA高通量技术等相关分子生物学手段,就LRP的体内外免疫活性展开系统研究,揭示
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在我国,莲藕被广泛种植,是极其丰富的食药用植物资源。莲藕渣是莲藕加工中的下脚料,绝大部分被丢弃,造成资源浪费。莲藕渣多糖(Lotus root residue polysaccharide,LRP)是莲藕渣中主要活性成分之一,前期研究表明其具有抗氧化、降血糖、止血、抗病毒和免疫调节等多种生物活性。本论文采用16S r DNA高通量技术等相关分子生物学手段,就LRP的体内外免疫活性展开系统研究,揭示了LRP的膳食处理对免疫低下小鼠肠道菌群的影响,可为相关产品开发应用和深入研究提供参考:(1)采集人体唾液、模拟人工胃液、小肠液对LRP进行模拟消化,以人类新鲜粪便为接种源,对LRP进行体外发酵,研究LRP的发酵特性及其对人肠道菌群的影响。模拟消化结果表明,LRP只有小部分被消化,大部分可以成功抵达大肠;发酵结果显示,LRP被肠道菌群降解为SCFAs,降低肠道p H;16S r DNA测序分析显示LRP降低肠道中厚壁菌门(Firmicutes)/拟杆菌门(Bacteroidetes)的比例,增加双歧杆菌(Bifidobacterium)的相对丰度,调节肠道微生物的组成。(2)以BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞为实验对象,LRP在不同时间点处理细胞,探讨LRP刺激腹腔巨噬细胞产生免疫应答的信号通路。结果显示,LRP在200μg/m L浓度内对巨噬细胞无毒作用;NO浓度随LRP处理浓度的提高/处理时间的延长而升高;LRP结合TLR4、TLR2受体,促进细胞因子的表达;促进核蛋白c-Jun、p65的表达,提高ERK1/2、JNK、p38蛋白及其磷酸化水平。因此,LRP通过MAPK/NF-κB途径增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞免疫应答。(3)以CTX诱导BALB/c小鼠建立免疫低下模型,研究LRP对小鼠免疫受损的保护作用。结果表明,CTX减轻小鼠体重、摄食量和饮水量;减小脾脏大小,降低小鼠胸腺、脾脏指数;对脾脏、肝脏造成损伤,使空肠绒毛变短、肠壁变薄;而LRP提高CTX小鼠增重率,增大小鼠脾脏,提高其免疫器官指数,缓解脾脏和肝脏的损伤,恢复空肠绒毛形态,修复器官的免疫损伤。(4)LRP干预调节了CTX诱导的免疫低下小鼠肠道菌群的结构。在门水平上,LRP显著提高免疫低下小鼠肠道中Bacteroidetes的相对丰度,降低致病菌ε-变形菌(Epsilonbacteraeota)的相对丰度;在科水平上提高毛螺旋菌科(Lachnospiraceae)、瘤胃菌科(Ruminococcaceae)和普雷沃氏菌科(Prevotellaceae)的相对丰度,在属水平上,LRP增加Lachnospiraceae_NK4A136_group、Alloprevotella和Bacteroides的相对丰度。因此,LRP对修复器官损伤和提高肠道免疫有良好的作用。
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