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目的:以大豆素(Daidzein,DAI)为研究对象,研究DAI的体外抗氧化活性及对大鼠原代肝细胞酒精性肝损伤的保护作用,并为治疗酒精性肝损伤提供新的思路和解决方案。方法:1.模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应系统,产生超氧阴离子·O2-,检测DAI清除·O2-能力;根据Fenton反应原理产生羟自由基·OH,检测DAI清除·OH能力。2.两步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞,并建立大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤模型(100 mM无水乙醇E-OH染毒大鼠肝细胞8 h)。3. MTS比色实验观察不同剂量E-OH对大鼠原代肝细胞氧化损伤作用,及DAI的预作用(1.0μM的DAI预作用2 h)对E-OH致大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤的保护作用。4.大鼠原代肝细胞在E-OH染毒前不同时间点经1.0μM的DAI处理或不同剂量(0.5~20μM)DAI预作用2 h,用酶学及生化学方法分析DAI预作用对细胞培养上清液中丙氨酸氨基转移酶(Alanine Aminotransferase, ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate Aminotransferase, AST)活性,细胞中丙二醛(Malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽(Glutathione, GSH)水平和超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)活性,以确定DAI对肝细胞酒精性氧化损伤的最佳干预时间与干预剂量。结果:1. DAI对·O2-和·OH都有一定的清除能力,并与槲皮素(Quercetin,QE)和VitC清除自由基的能力比较,DAI清除自由基的能力强于VitC但比QE弱。2. MTS比色实验显示随着E-OH剂量的上升,对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤加剧(P <0.05); 1.0μM的DAI预作用2 h可明显改善E-OH所致的氧化损伤(P <0.01)。3. DAI预作用对酒精性肝损伤的保护作用的时间剂量效应:E-OH暴露前2-6 h经0.5~2.5μM的DAI干预,保护效果明显,ALT、AST、MDA水平与酒精组比较,显著性降低(P<0.01),GSH、SOD水平较酒精组则显著性升高(P<0.01)。结论:1. DAI具有直接清除·O2-和·OH的体外抗氧化作用。2. DAI预干预可能通过减少GSH耗竭,提高抗氧化酶活性,抑制脂质过氧化来保护大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤,且保护作用呈一定的剂量与时间效应关系。