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p-乳球蛋白(p-lactoglobulin, β-LG)是乳清蛋白的主要成分,属于Lipocalin家族,能和视黄醇、p-胡萝卜素、维生素D等脂溶性小分子化合物结合,起到载体作用,因此,具有应用于口服结肠定位给药系统的潜力。由于p-LG具有保护脂溶性小分子不受胃肠道环境影响的作用,研究p-LG进入肠道细胞的方式具有重要意义。目前关于p-LG受体的报道还比较少,只有关于人恶性多发性畸胎瘤细胞、红细胞、生殖细胞、哺乳动物杂交瘤细胞中受体的研究,有关p-乳球蛋白在肠道细胞中受体的研究还未见报道。本课题通过免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, Co-IP)技术结合一维聚丙烯酰胺凝胶电泳以及纳升级液相色谱-串联质谱(nanoLC-MS/MS)技术研究牛p-LG在肠道肿瘤细胞中的识别受体。选择体外肠道肿瘤研究较为常用的细胞株Caco-2细胞和LoVo细胞进行体外培养,作为本课题的受试细胞。发现Caco-2细胞形态伸展连接成片,传代后72 h时细胞汇合度达到90%以上。LoVo细胞形态规则,48 h时汇合度达到90%。将受试细胞以106个/mL的浓度接种于玻底培养皿。使用荧光探针分别标记细胞膜、细胞核；激光共聚焦显微镜观察荧光标记的p-LG与细胞作用0 min、15 min、30 min、60 min时p-乳球蛋白与细胞的相互作用情况。结果发现在p-LG分别与Caco-2细胞和LoVo细胞相互孵育的0-30 min内,p-LG随时间的延长逐渐在细胞膜外侧聚集,但在30-60 min内β-LG在细胞膜外侧的聚集量没有明显变化。进一步研究p-LG与肠道肿瘤细胞的相互作用,将p-LG与Caco-2细胞和LoVo细胞分别进行1h孵育后,使用Co-IP分离p-LG及其在肠道肿瘤细胞上的相互作用蛋白。将Co-IP分离下来的样品进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(sodium dodecyl sulfonate-polyacrylamide gelelectrophoresis, SDS-PAGE)电泳、考马斯亮蓝染色、免疫印迹法检测。结果发现Co-IP分离出的样品经过SDS-PAGE电泳分离后、考马斯亮蓝染色观察发现,在20-70 kDa之间存在蛋白条带,但无法观察到β-LG的蛋白条带；经免疫印迹法检测,发现Co-IP分离出的样品存在β-LG,说明Co-IP成功分离β-LG及其肠道肿瘤细胞相互作用蛋白。利用硝酸银染色法和nanoLC-MS/MS技术鉴定β-LG在肠道肿瘤细胞Caco-2细胞和LoVo细胞的相互作用蛋白。结果发现两株肠道肿瘤细胞中存在与β-LG相互作用的蛋白可能是组蛋白H4、核糖体蛋白S18、S25,共3种蛋白,但未发现细胞受体。