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压电生物传感器作为一种新型的分析手段,因其较低的检测下限、简单的操作步骤、低廉的成本等优势,已被广泛应用在了临床、环境、食品等领域。其表面敏感膜的制备,是压电生物传感器构建的关键步骤。本文致力于白细胞介素4-白细胞介素4受体(IL-4-sIL-4R)的生物传感体系的构建,并将其应用于药物活性评价中。主要内容如下:
(1)利用石英晶体微天平(QCM)构建了两种基于白细胞介素4-白细胞介素4受体的生物传感体系,实现了对sIL-4R与IL-4特异性结合反应的实时监控。
利用α-硫辛酸自组装膜技术将sIL-4R固定在石英晶体金电极的表面,构建了基于sIL-4R的亲和型生物传感活性界面。实验结果表明:此方法能够较为有效地将sIL-4R固定在金表面,固定的sIL-4R可以和IL-4发生特异性、浓度依赖性的结合反应。10mg·L-1是sIL-4R的最佳固定浓度,其固定量可达112.46ng,加入10mgL-1的IL-4后可引起62.96ng的质量变化,RSD分别为3.90%和4.86%,说明实验可信度较好。本文同时利用QCM实时监测了sIL-4R与IL-4之间的特异性作用过程,并对其进行动力学分析,得到其解离平衡常数KD为1.42×10-8M。
利用生物素-亲和素的强结合作用,将生物素衍生化的sIL-4R固定于石英晶体金电极表面,构建了基于sIL-4R的亲和型生物传感活性界面。实验结果表明:此方法能更有效的将sIL-4R固定在金表面,固定的sIL-4R可与IL-4发生特异性的、浓度依赖型的结合反应。15mg·L-1是sIL-4R的最佳固定浓度,其固定量可达147.19ng,加入10mg·L-1的IL-4后可引起97.11ng的质量变化,RSD分别为4.98%和4.25%,说明实验可信度较好。利用QCM实时监测其反应过程,得到解离平衡常数KD为1.38×10-8M。
(2)将白细胞介素4-白细胞介素4受体生物传感体系应用在药物活性评价中,并初步验证了此方法在药物活性评价中的可行性。
本文分别对两种生物传感体系进行了对比,并对sIL-4R拮抗剂进行拮抗活性研究,发现两种生物传感体系均能够较好的评价其药物活性,并得出4,7-二甲氧基异黄酮的拮抗率为30%左右,而硫藤黄菌素拮抗活性为5%。
对传感器敏感表面的再生及使用寿命进行的研究表明IL-4结合至表面后可用0.08M的尿素洗脱其与sIL-4R的结合,再生得到sIL-4R包被的样品池表面,重复再生6次以内的界面其结合活性能保持90%以上。且金基片表面固定的sIL-4R可用pihanra溶液洗脱,用于再次固定sIL-4R,此方法再生的基片只能使用3次。