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(一)研究目的:探讨肥胖对食管癌患者短期免疫营养水平、并发症及术后六个月生活质量的影响。研究方法:采用纵向研究方法,收集接受根治性食管癌切除术的患者资料,包括社会人口学资料(年龄、性别、职业、婚姻状况、体重、抽烟、饮酒、身高、体重)和疾病相关资料(总胆固醇、甘油三酯、白蛋白、TNM分期、病理类型、部位、合并疾病、麻醉等级、通气储量、FEV1%),根据体重指数分为肥胖组和正常体重组,采用问卷调查法记录患者术前和术后六个月的生活质量,并发症和反映免疫营养水平的血清学指标。生活质量采用30条目的生活质量核心量表和18条目的食管癌患者生活质量调查量表评价。采用倾向值匹配方法平衡患者社会人口学资料和疾病资料,比较两组生活质量及预后的差异。采用倾向性评分回归调整分析术后体重变化对生活质量下降的影响。研究结果:(1)本研究共纳入343位患者,其中肥胖组109人,正常体重组234人。肥胖组中的多项社会人口学资料和疾病相关资料和正常体重组相比,差异具有统计学意义,包括性别(X2=5.346,P<0.05)、抽烟(χ2=4.954,P<0.05)、甘油三酯(t=-2.570,P<0.05、白蛋白(t=-3.755,P<0.001)、合并疾病(χ2=8.759,P<0.05)、糖尿病(χ2=9.37 1,P<0.05)、高血压(χ2=4.168,P<0.05)和通气储量(t=2.590,P<0.05)。(2)肥胖组的前白蛋白、血红蛋白、淋巴细胞绝对值和住院时间与正常体重组相比,差异均没有统计学意义(P>0.05)。肥胖组体重平均下降11.96kg,正常体重组体重平均下降6.81kg,差异具有统计学意义(P<0.05);体重下降幅度≥10%的患者在肥胖组中的比例为57.2%,在对照组中的比例为42.8%,差异具有统计学意义(P<0.001)。(3)肥胖组并发症等级与正常体重组相比,差异没有统计学意义。主要并发症中除吻合口瘘的发生率肥胖组高于正常体重组外(χ2=1 0.812,P=0.001),肺部感染、胸腔积液和乳糜胸的发生率在两组间无显著差异。(4)基线资料的比较中,肥胖组的总体生活质量和躯体功能得分低于正常体重组;术后六个月的比较中,肥胖组的总体生活质量、躯体功能维度和社会功能维度得分均低于正常体重组,并且多个症状维度得分都高于正常体重组。其中总体生活质量(62.08 vs 65.94,P<0.05),躯体功能(72.23 vs 78.32,P<0.05),社会功能(68.35 vs 75.15,P<0.05),疲乏(35.17 vs 27.67,P<0.001),腹泻(27.83 vs 19.72,P<0.05),进食困难(28.82 vs 23.97,P<0.05),吞咽痛(26.71 vs 20.44,P<0.05),味觉障碍(27.83 vs 21.25,P<0.05)。(5)体重减轻能够使食管癌术后多方面生活质量恶化。体重减轻的幅度越多,躯体功能越低(β=-0.40,P<0.001),疲乏(β=0.19,P<0.05)、进食困难(β=0.24,P<0.05)、吞咽痛(β=0.27,P<0.001)和味觉障碍(β=0.26,P<0.001)症状越重,吻合口瘘也会加重患者疲乏(β=0.15,P<0.05)症状。研究结论:(1)肥胖不会影响患者短期免疫营养水平和并发症严重程度,但是会增加吻合口瘘的发生率。(2)肥胖能够加重食管癌患者的术后疲乏感,影响食欲和进食状况,导致营养不良的风险增加。(3)术后应加强对肥胖患者吻合口瘘的观察,科学的体重管理和及时的营养支持对肥胖的食管癌患者来说是必须的。(二)研究目的:研究食管癌细胞表达FOXP3(forkhead box protein 3)对肿瘤微环境中的细胞因子及淋巴细胞分化的作用。研究方法:采用实时荧光定量PCR技术和蛋白质免疫印迹法确定食管癌细胞系中FOXP3基因表达含量,采用质粒转染和病毒转染的方法改变食管癌表达FOXP3基因水平,将调节前后的食管癌细胞系与人外周血淋巴细胞共培养72小时,并分别于24小时、48小时和72小时收集上清液。离心分离上清液和悬浮的淋巴细胞,分别于-20℃和4℃保存。采用酶联免疫吸附法测定微环境中TGF-β,IFN-γ,TNF-α,IL-23,IL-1β,IL-10的含量,采用流式细胞术检测淋巴细胞CD4+CD25+FOXP3+ T细胞和CD8+CD28+ T细胞的分化情况,比较共培养后72小时收获的食管癌细胞数量。研究结果:(1)FOXP3基因在450细胞系的表达量最低,在TE-1细胞系的表达量最高。TE-1细胞系的FOXP3表达量约为450细胞系的4～5倍。因此,450细胞系为质粒转染的过表达体系,TE-1为病毒干扰的降表达体系。(2)过表达体系中,450细胞系中IFN-y表达量下降,TGF-β,IL-10表达量上升,过表达组与对照组的差异具有统计学意义(P<0.05)。TNF-α,IL-1β,IL-23的含量未受FOXP3表达量的影响。降表达体系中,TE-1细胞系中IFN-y表达量上升,TGF-β,IL-10表达量下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。TNF-α,IL-1β,IL-23的含量在两组间没有统计学意义(P>0.05)。直接共培养体系和间接共培养体系的结果一致,且两种共培养体系间无统计学差异(P>0.05)。(3)过表达体系中,450细胞系表达FOXP3含量增多使淋巴细胞向CD4+CD25+FOXP3+T细胞的分化增多,转染组数量明显高于对照组,而CD8+CD28+T细胞的数量随之减少,转染组数量明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。降表达体系中,TE-1细胞系表达FOXP3含量减少使淋巴细胞向CD4+CD25+FOXP3+T细胞的分化减少,转染组数量明显低于对照组,而CD8+CD28+T细胞的数量随之增多,转染组数量明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。直接共培养体系和间接共培养体系的结果一致。(4)共培养72小时后,过表达体系中,收获的450细胞转染组数量明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。降表达体系中,收获的TE-1细胞转染组数量明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。直接共培养体系和间接共培养体系的结果一致。研究结论:(1)食管癌过表达FOXP3能够使IFN-γ的分泌减少,TGF-β,IL-10的分泌增多,外周血淋巴细胞向Treg的分化增多,而CTL的比例下降,从而营造一种利于肿瘤的生长和转移的微环境,抑制机体抗肿瘤效应。(2)食管癌降表达FOXP3能够使IFN-γ的分泌增多,TGF-β,IL-10的分泌减少,外周血淋巴细胞向Treg的分化减少,而CTL的比例升高,从而促进肿瘤凋亡,抑制肿瘤的生长和转移,增强机体抵抗免疫逃逸的能力。