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卵巢癌是发病率第二位的女性生殖器恶性肿瘤，但死亡率居妇科恶性肿瘤之首。卵巢癌的高发年龄段在40～70岁之间。发病率占妇科恶性肿瘤的22.9%，仅次于宫颈癌，并以每年1%的速度递增。由于缺乏特异的临床症状和相应的早期诊断手段，患者仅在出现腹部疼痛，消化道症状时才就诊，初诊时2/3已属晚期。手术常难彻底根除肿瘤，故以紫杉醇联合铂类化疗在卵巢癌综合治疗中占有重要地位，但是肿瘤细胞的原发性或继发性耐药是影响化疗效果，造成肿瘤复发的主要原因。使患者术后的五年生存率仅为20%～30%。若想提高卵巢癌患者的治愈率，明确耐药相关分子机制，寻找有效的耐药逆转剂和治疗靶标是当务之急，这对提高卵巢癌化疗敏感性，逆转耐药，调整治疗方案具有重要的意义。近年来发现一类依赖细胞因子的负性调控蛋白，细胞因子信号转导抑制因子SOCS家族。该家族主要通过对JAK/STAT信号通路的负反馈调节发挥生物学功能。JAK/STAT途径参与多种细胞因子，生长因子和激素的转导达到调节细胞的生长，增殖，分化和凋亡的目的。近年来发现JAK/STAT信号通路参与多种肿瘤的发生，发展。SOCS家族则是通过负反馈调节该通路而抑制细胞异常增殖，促进细胞凋亡。该实验通检测卵巢癌顺铂敏感株A2780细胞、顺铂耐药株CP70细胞中SOCS2的表达，探讨SOCS2与卵巢癌铂类耐药的关系。应用甲基化酶抑制后两种卵巢癌细胞中SOCS2的变化及对化疗药物的敏感性。探讨SOCS2在卵巢癌细胞耐药中可能起到的作用，观测SOCS2蛋白表达升高后CP70细胞对顺铂化疗敏感性的改变。为逆转卵巢癌铂类耐药提供具有临床应用价值的依据。研究目的1．探讨SOCS2基因表达与卵巢癌铂类耐药的相关性及其在卵巢癌铂类耐药中的可能机制。2．探讨A2780和CP70细胞SOCS2基因的甲基化状态。探究应用甲基化酶抑制剂后SOCS2的表达变化及其对顺铂耐药性影响。3．pEGFP-N1-SOCS2瞬时转染增加SOCS2蛋白表达后卵巢癌细胞对顺铂耐药性的改变及其可能作用机制。研究内容和方法1．RT-PCR、western bloting、免疫细胞化学检测卵巢癌顺铂敏感株A2780细胞、顺铂耐药株CP70细胞中SOCS2的mRNA和蛋白表达及定位；western bloting、免疫细胞化学检测顺铂处理后A2780和CP70细胞中SOCS2蛋白表达及定位的变化，分析SOCS2表达与卵巢癌铂类耐药的相关性。2．甲基化实时定量PCR检测A2780和CP70细胞SOCS2基因的甲基化状态。RT-PCR, western bloting、免疫细胞化学法检测甲基化酶抑制剂5-Aza-CdR处理A2780与CP70细胞后SOCS2的mRNA和蛋白表达。MTT法检测药物处理后两种细胞对顺铂敏感性的改变。3．MTT法检测pEGFP-N1-SOCS2瞬时转染CP70细胞增加SOCS2蛋白表达后CP70细胞对顺铂敏感性的改变；TUNEL法检测增加SOCS2蛋白表达后，顺铂诱导CP70细胞凋亡改变的状况。研究结果1．A2780细胞的SOCS2基因和蛋白表达水平较CP70细胞高，在A2780细胞与CP70细胞中均呈浆表达。顺铂处理A2780和CP70细胞后，两种细胞中SOCS2蛋白表达均呈时间和剂量依赖性降低。2．A2780和CP70细胞SOCS2基因都有不同程度的甲基化改变。应用不同剂量的甲基化酶抑制剂处理两种细胞后，A2780与CP70细胞中SOCS2的蛋白表达呈现剂量依赖性增高，并呈现核浆共表达状态。对顺铂的敏感性均增强。3．感染pEGFP-N1-SOCS2后，CP70细胞对顺铂的敏感性有待进一步探讨。结论1．SOCS2在顺铂敏感细胞和耐药细胞中表达强度不同，顺铂诱导后两种卵巢癌细胞SOCS2蛋白表达呈时间和剂量依赖性减弱，提示SOCS2在卵巢癌顺铂耐药机制形成中发挥重要作用。2．A2780和CP70细胞SOCS2的低表达可能与其启动子CpG岛的甲基化状态有关，去甲基化后，SOCS2蛋白表达明显升高，并对DDP的敏感性增强。3．增加SOCS2蛋白表达后卵巢癌细胞对顺铂的敏感性改变有待进一步探讨，其机制可能与其调节的JAK/STAT途径抑制了细胞的异常增值有关，SOCS2可能成为逆转卵巢癌铂类耐药的新基因。