第一部分COPD患者病原体分布特点目的:了解本院不同时期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者常见病原菌,非典型病原体与呼吸道病毒的分布,分析不同时期COPD患者的感染状况及变化,探讨病原体与COPD病情进展之间的关系,为临床合理用药提供理论依据。方法:前瞻性筛选招募南昌大学附属人民医院2018年3月~2019年12月门、急诊及住院的COPD稳定期,慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)患者各150例,并收集患者的一般临床资料。收集2组患者痰标本进行病原菌培养和菌株鉴定;采集2组患者外周静脉血,以间接免疫荧光实验法(IFA)检测血清中8种呼吸道感染常见病原体的IgM抗体,包括非典型病原体:嗜肺军团菌(LP)、肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP);和病毒抗体:甲型流感病毒(F1u A)、乙型流感病毒(F1u B)、副流感病毒(PIV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)。分析比较各组间病原体的分布特征与差异。结果:1研究对象一般资料:共纳入300例COPD患者,其中男性230例(76.7%),年龄M(IQR)为68.0(61.0,75.0)岁,病程M(IQR)为12.0(7.0,17.0)年,2组患者在一般临床特征方面无统计学差异(p>0.05)。2痰培养结果:稳定期COPD组患者病原菌分布:痰培养阳性57例,检出率38.0%,检出病原菌73株,其中单病原菌41株,占71.9%,双病原菌16株,占28.1%。检出病原菌中革兰阴性杆菌47株,占64.4%,前3位常见菌株依次是流感嗜血杆菌,肺炎克雷伯杆菌,铜绿假单胞菌;革兰阳性菌25株,占34.2%,前3位常见菌株依次是金黄色葡萄球菌,肺炎链球菌,溶血性链球菌;真菌1株为白色念珠菌,占1.4%。AECOPD组患者病原菌分布:痰培养阳性101例,检出率67.3%,检出病原菌129株,其中单病原菌73株,占72.3%,双病原菌28株,占27.7%。检出病原菌中革兰阴性杆菌98株,占76.0%,前3位常见菌株依次是肺炎克雷伯杆菌,流感嗜血杆菌,铜绿假单胞菌;革兰阳性菌27株,占20.9%,前3位常见菌株依次是肺炎链球菌,金黄色葡萄球菌,溶血性链球菌;真菌4株,占3.1%,为白色念珠菌3株,曲霉菌1株。AECOPD组患者痰培养阳性率(67.3%vs 38.0%,χ~2=25.887,p<0.05)明显高于稳定期COPD组患者。3非典型病原体结果:稳定期COPD组患者检测阳性者25例,阳性率为17.7%,依次为MP 14例,LP 11例;AECOPD组患者检测阳性者49例,阳性率为32.7%,依次为MP 29例,CP 1例,LP 19例,统计2组病原微生物感染情况发现AECOPD组总阳性率,MP和LP阳性率均显著高于稳定期COPD组,p<0.05。4常见呼吸道病毒结果:稳定期COPD组患者检测阳性者12例,阳性率为8%,依次为Flu A 2例,Flu B 4例,PIV 2例,RSV 1例,ADV 3例;AECOPD组患者检测阳性者33例,阳性率为22%,依次为Flu A 9例,Flu B 18例,PIV3例,RSV 2例,ADV 1例。统计2组患者病毒感染情况发现AECOPD组总阳性率,Flu A和Flu B阳性率显著高于稳定期组,p<0.05。结论:1本地区不同时期COPD患者均可检出病原菌,部分稳定期COPD患者呼吸道存在细菌定植。AECOPD组患者检出率高于稳定期组,常见病原体均为革兰阴性菌,临床治疗应以病原菌培养结果为指导,合理选用抗生素。2本地区COPD患者中,AECOPD组非典型病原体感染率显著高于稳定期组,以MP,LP多见,提示非典型病原体参与COPD的急性加重机制。3本地区AECOPD组病毒总检出率显著高于稳定期组,病毒感染与COPD急性加重密切相关。AECOPD组主要病毒为Flu A,Flu B,PIV;稳定期COPD组主要病毒为Flu B,ADV,Flu A。第二部分COPD患者T淋巴细胞亚群与细胞因子水平的研究目的:通过检测COPD患者外周血T淋巴细胞亚群特征及IL-4、IL-6、IL-8、IL-17等细胞因子水平,比较上述指标各组间的差异,探讨其在不同时期的COPD患者中的临床意义,以指导COPD的免疫预防和临床治疗。方法:前瞻性筛选南昌大学附属人民医院2018年3月~2019年12月门、急诊及住院的COPD稳定期,AECOPD患者各150例,筛选同期在本院体检的健康人群150例为健康对照组。收集研究对象的一般临床资料,包括性别、年龄、体重指数、病程、吸烟史等。采集3组研究对象外周静脉血,以流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+的表达,计算CD4+/CD8+比值;酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定细胞因子IL-4、IL-6、IL-8、IL-17,比较与分析3组间各观察指标的差异。结果:1研究对象一般资料:共纳入300例COPD患者,其中男性230例(76.7%),年龄M(IQR)为68.0(61.0,75.0)岁,病程M(IQR)为12.0(7.0,17.0)年。150名健康对照组中男性105例(70.0%),年龄M(IQR)为65.0(60.0,70.0)岁,BMI为(23.6±3.7)kg/m2。3组间性别、年龄、BMI无显著性差异(p>0.05)。2外周血T淋巴细胞亚群结果:与AECOPD组CD3+(%)、CD4+(%)、CD4+/CD8+(47.03±9.11、29.34±8.86、0.98±0.29)相比较,稳定期COPD患者水平(53.83±10.48、35.65±6.59、1.40±0.27),健康对照组人群水平(66.17±8.59、42.41±8.12、2.02±0.45)均显著升高(p<0.05);与AECOPD组CD8+(%)(29.87±6.37)相比较,稳定期COPD患者(25.42±6.91),健康对照组人群(20.95±6.37)均显著下降(p<0.05)。与稳定期患者CD3+(%)、CD4+(%)、CD4+/CD8+(53.83±10.48、35.65±6.59、1.40±0.27)比较,健康对照组水平(66.17±8.59、42.41±8.12、2.02±0.45)显著上升(p<0.05);与稳定期COPD患者CD8+(%)(25.42±6.91)比较,健康对照组人群(20.95±6.37)均显著下降(p<0.05)。3外周血细胞因子结果:AECOPD组IL-4、IL-6、IL-8、IL-17水平(92.93±23.46、73.81±16.68、92.34±16.65、77.25±22.38)(pg/ml)较稳定期组(71.25±20.13、35.87±5.74、47.54±6.91、59.61±12.57)(pg/ml)及健康对照组(48.73±8.96、9.67±1.89、25.63±5.53、23.76±6.54)(pg/ml)上升,差异有统计学意义(p<0.05);稳定期组IL-4、IL-6、IL-8、IL-17水平(71.25±20.13、35.87±5.74、47.54±6.91、59.61±12.57)(pg/ml)较健康对照组(48.73±8.96、9.67±1.89、25.63±5.53、23.76±6.54)(pg/ml)上升,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:1检测COPD患者外周血中的T淋巴细胞、细胞因子有助于进一步研究免疫功能在发病机制中的作用。2 COPD患者存在细胞免疫功能异常,表现为T淋巴细胞功能失调,炎症细胞因子紊乱。3与稳定期COPD患者相比较,AECOPD患者T淋巴细胞功能失调,炎症细胞因子紊乱更显著,提示细胞免疫功能异常在气道慢性炎症的病理生理过程中发挥重要作用,其水平可以作为判断病情及预后的监测指标。第三部分布地奈德/福莫特罗和胸腺肽对COPD患者免疫功能的影响目的:探讨布地奈德/福莫特罗(BUD/FM)和胸腺肽对稳定期COPD患者外周血T淋巴细胞亚群和细胞因子水平的影响。方法:筛选南昌大学附属人民医院2018年3月~2019年12月门诊稳定期COPD80例,收集性别、年龄,体重指数、病程、吸烟史、合并症等获得性因素。采取前瞻性、随机、平行、开放和对照的研究方式,由专人(未参加试验者)编制随机编码表,按1:1的比例随机分为BUD/FM组和胸腺肽组,每组40例。在常规治疗的基础上,BUD/FM组患者给予BUD/FM吸入剂(320ug:9ug*60吸*1支/盒),1吸/次,每日2次,吸入12周;胸腺肽组给予胸腺肽α1皮下注射,剂量为1.6mg/次,每周2次,疗程12周。并定期进行临床随访。于干预前和干预结束后测定T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+水平,计算CD4+/CD8+比值;测定细胞因子IL-4、IL-6、IL-8、IL-17水平,进行体格检查并观察生命体征,血常规、尿常规、肝、肾功能及不良反应等指标。结果:1一般资料:共纳入80名稳定期COPD患者,其中男性57例(71.3%),年龄M(IQR)为68.0(52.0,74.0)岁,BMI为(24.4±5.3)kg/m2,病程M(IQR)为12.0(7.0,17.0)年。2组患者在的一般资料对比方面无统计学差异(p>0.05),具有可比性。2组患者均全程完成治疗过程,未出现脱落病例。2两组治疗前后T淋巴细胞水平与变化比较:治疗前2组间T淋巴细胞亚群指标无显著性差异(p>0.05),具有可比性。干预12周后,BUD/FM组患者CD3+(%)、CD4+(%)、CD4+/CD8+均较治疗前上升,变化值分别为7.86±2.57、4.54±1.59、0.33±0.12,CD8+(%)较治疗前下降,变化值为4.39±1.43,差异均有统计学意义(p<0.05)。胸腺肽组患者CD3+(%)、CD4+(%)、CD4+/CD8+均较治疗前上升,变化值分别为3.65±1.23、2.18±0.81、0.15±0.06,CD8+(%)较治疗前下降,变化值为1.97±0.72,差异均有统计学意义(p<0.05)。并且治疗结束后BUD/FM组变化值明显高于胸腺肽组,差异具有统计学意义(p<0.05)。3两组治疗前后细胞因子水平与变化比较:治疗前2组间细胞因子水平无显著性差异(p>0.05),具有可比性。干预12周后,BUD/FM组患者IL-4、IL-6、IL-8和IL-17均较治疗前下降,变化值分别为18.28±4.35,16.19±5.76,17.93±5.81,21.64±4.80(?±s,pg/ml),差异均有统计学意义(p<0.05)。胸腺肽组患者IL-4、IL-6、IL-8和IL-17均较治疗前下降,变化值分别为9.54±3.36,7.87±2.61,7.80±2.79,15.39±4.53(?±s,pg/ml),差异均有统计学意义(p<0.05)。并且治疗结束后BUD/FM组变化值明显高于胸腺肽组,差异具有统计学意义(p<0.05)。4两组患者治疗前后血常规、尿常规、肝肾功能、血糖血脂等生化指标、胸片、心电图等未见明显异常改变。2组患者在治疗期间均未严重副作用。结论:1在稳定期COPD患者中,BUD/FM吸入剂,或胸腺肽α1连续干预12周均可以改善外周血T淋巴细胞亚群失调,纠正血清细胞因子紊乱,抑制炎症反应,并且没有增加药物不良反应的发生率。2在稳定期COPD患者中,BUD/FM吸入剂改善T淋巴细胞亚群失调,纠正细胞因子紊乱疗效较胸腺肽α1更显著。