目的1探究刺五加总皂苷最佳的提取方法。2研究刺五加法尼基焦磷酸合酶、鲨烯合酶和鲨烯环氧酶基因启动子DNA甲基化及其对刺五加皂苷合成与积累的影响。3五加科法尼基焦磷酸合酶、鲨烯合酶和鲨烯环氧酶基因适应性进化位点的挖掘。方法1用不同浓度的乙醇溶液对刺五加进行超声提取,通过分光光度法对超声时间、物料比以及乙醇浓度等条件进行考察。2通过重亚硫酸盐测序技术确定目的基因启动子区域嘧啶C甲基化位点及类型,反转录-聚合酶链反应法与香草醛-浓硫酸显色法确定目的基因不同甲基化类型的表达量及其总皂苷含量。利用液相色谱-串联质谱法分析高低DNA甲基化组间差异。3利用PAML等方法对五加科13条法尼基焦磷酸合酶基因、32条鲨烯合酶基因、22条鲨烯环氧酶基因进行适应进化分析。结果1超声时间20 min,物料比1:25,乙醇体积分数75%时,吸光度最高,即刺五加总皂苷的得率最高。2刺五加法尼基焦磷酸合酶基因有19个DNA甲基化位点,8种DNA甲基化类型;鲨烯合酶基因有9个甲基化位点,2种甲基化类型;鲨烯环氧酶基因有16个甲基化位点,7种甲基化类型。高DNA甲基化组总皂苷含量1.07±0.12 mg/g,低DNA甲基化组总皂苷含量2.92±0.32 mg/g。统计学分析发现三种基因的基因表达量分别与其皂苷含量成显著正相关(P<0.05),甲基化比率与皂苷含量呈显著的负相关关系(P<0.01)从刺五加中共检测到488种代谢物,筛选出的100种差异代谢物。发现低DNA甲基化组中与甲羟戊酸途径有关的多数代谢产物含量高于高DNA甲基化组。3得到PAML分析并未发现存在有正选择位点,Datamonkey分析则发现鲨烯合酶正选择位点21个鲨烯环氧酶正选择位点18个结论1刺五加总皂苷提取的最佳方案超声时间20 min,物料比1:25,乙醇体积分数75%。2刺五加法尼基焦磷酸合酶、鲨烯合酶、鲨烯环氧酶基因启动子区域存在DNA甲基化位点,且该区域的DNA甲基化可显著抑制甲羟戊酸途径的合成,进而降低终产物刺五加皂苷的含量。3负选择在五加科刺五加法尼基焦磷酸合酶、鲨烯合酶、鲨烯环氧酶进化过程中起着较大作用。图24幅;表13个;参86篇。