【摘 要】
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核糖体是由核糖体蛋白和RNA组成,是细胞内翻译的重要机器,与细胞的生长、细胞对各种生理状态的适应都有很密切的关系。在植物中有将近200个核糖体蛋白基因都必须协同表达,只
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核糖体是由核糖体蛋白和RNA组成,是细胞内翻译的重要机器,与细胞的生长、细胞对各种生理状态的适应都有很密切的关系。在植物中有将近200个核糖体蛋白基因都必须协同表达,只有这些蛋白共同表达并且一起组装才能形成核糖体。这个现象不仅仅发生在转录层面而且也在翻译层面。我们通过生物信息学分析,在植物启动子上找到了与核糖体蛋白基因共表达有关的两个保守的motifs。这个发现在Carlos Molina和Erich Grotewold研究拟南芥全基因组的motifs中也发现到了。我们以拟南芥核RPL36B为研究对象,在拟南芥RPL36B启动子上游发现的三个保守序列中分别引入点突变,这样我们就得到了包含所有突变情况的七个突变型,并将这七个不同的突变型分别克隆到酵母载体YCplac111和YEplac195,以及农杆菌载体pCAMBIA1301,然后通过转化技术将含有突变的穿梭质粒转化到酵母、胡萝卜和烟草中,进而运用Northern blotting对保守motifs在转录调控中的作用进行研究。初步结果分析发现不同的motifs缺失的组合会对核糖体蛋白表达有一定的影响,但是还有待进一步优化实验条件进行重复性实验。并且由结果可以看出在酵母中有转录因子可以识别植物中保守的motifs,故考虑进一步做细菌的单杂交检测。植物转基因还有待进一步完善,挑选烟草转基因的高表达细胞株,更好更精确的检测表达量。为了进一步研究这些保守的motifs在转录调控中的作用,我们还构建了LacZ的报告基因系统,以便准确检测核糖体蛋白活性。
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