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为研究H9N2亚型禽流感病毒（AIV）对哺乳动物的致病力，本研究选取了20092010年间从我国南方地区分离到的6株H9N2亚型AIV，测定分析了其基因组序列及在小鼠体内的复制能力。基因组序列分析显示：6株病毒HA基因的裂解位点处均为-PSR（K）SSRGLF-，为低致病性分子特征，6株病毒均具有人样受体结合位点Leu226，其他受体结合位点仍具有AIV的特征（Asn183、Ala190和Gly228）。6株病毒的PB2蛋白仍保持禽流感病毒低致病性分子特征（Glu627和Asp701）。全基因遗传进化分析表明，部分病毒的内部基因（如NS、M等）与其他亚型病毒在进化上较接近，可能成为其他亚型病毒的基因供体。BALB/c小鼠人工感染试验结果显示6株病毒对小鼠呈现为低致病性,病毒仅局限于小鼠呼吸道复制。八质粒反向遗传操作系统基于双向转录载体，如pBD，pHW2000等，同时含有RNA聚合酶Ⅰ启动子序列和方向与之相反的RNA聚合酶Ⅱ启动子序列，能同时翻译出聚合酶复合体并转录出病毒vRNA，并产生并释放感染性病毒颗粒。该系统的建立能大大缩短构建重组质粒、拯救病毒的周期。本研究将PR8的6个内部基因克隆至pBD载体上，并通过拯救rPR8-GD322重组病毒验证了该八质粒反向遗传操作系统，为实验室的科研工作提供了一个新的平台。为应对clade7分支高致病性禽流感病毒持续发生的抗原性改变及其引发的潜在禽流感病毒的地方性流行，我们迫切需要根据流行监测的抗原分析结果挑选合适的供体株制备疫苗候选株。在八质粒反向遗传操作系统的基础上，以A/Puerto Rico/8/34（PR8）的内部基因为骨架，从clade7.2H5N1禽流感病毒A/Chicken/Liao Ning/S4092/2011（简称CK/LN/S4092）获得表面基因HA及NA，并对HA基因进行分子修饰，去除与H5亚型禽流感病毒致病力有关的HA蛋白裂解位点处的多个连续碱性氨基酸，使其获得低致病性禽流感病毒的分子特征（即将-PQIEGRRRKR-突变为-PQRETR-），从而构建出clade7.2H5N1亚型禽流感病毒疫苗候选株rPR8-LN/S4092，为进一步的免疫保护实验奠定了基础。埃及禽流感疫苗大多依赖进口，本研究应埃及政府委托，以A/Chicken/Egypt/A2/D/2011（简称CK/Eg/A2/D）H9N2亚型AIV为疫苗种毒，利用本研究构建的八质粒反向遗传操作平台，人工拯救出了重组毒rPR8-Eg/A2/D,测序结果表明，疫苗株的8个基因来源与预期完全一致。