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目的:盆腔器官脱垂（Pelvic organ prolapse,POP）是一类因为盆底支持结构缺陷或损伤所引起,以支持结构中结缔组织薄弱为主要病理基础,以子宫及其周围组织及器官位置下移为主要表现,导致女性生活质量下降的常见疾病。POP在绝经后的老年女性常发,尽管不会影响生命,但患此疾病的女性生活质量大大降低。时至今日,POP的发病机制尚不完全清楚。盆底系统的支持功能主要来源于结缔组织中的胶原蛋白。如果胶原蛋白含量减少、结构改变,盆底支持力就会减小,POP就有可能发生。成纤维细胞凋亡增加可导致组织中胶原含量减少。转化生长因子β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）被认为是一个重要的纤维化促进因子,能够促进成纤维细胞分泌胶原蛋白。TGF-β1通过TGF-β1/Smad信号通路发挥作用,Smad是TGF-β1的下游因子,它通过特定区域分子的磷酸化精确的调节细胞的稳态和转录应答。CKIP-1全称为酪蛋白激酶2相互作用蛋白1（Casein kinase-2 interacting protein-1,CKIP-1）,又被称为PLEKHO1（pleckstrin homology protein family O subfamily member1）。CKIP-1蛋白能对TGF-β1的活性起到抑制作用,在多种组织与细胞中参与调节细胞凋亡。在POP中,是否CKIP-1通过调控TGF-β1/Smad3信号通路影响成纤维细胞胶原蛋白分泌及影响细胞凋亡尚有待阐明。通过生物信息学软件http://www.targetscan.org/预测及查阅文献发现mi R-98-5p与CKIP-1存在结合位点,同时,通过生物信息学数据库https://starbase.sysu.edu.cn预测及查阅文献发现mi R-98-5p与Lnc RNA NEAT1存在结合位点。而Lnc RNA常与micro RNA竞争性结合来调控下游的蛋白。Lnc RNA NEAT1是否通过抑制mi R-98-5p上调CKIP-1的表达进而影响盆底支持组织成纤维细胞胶原蛋白分泌和细胞凋亡尚有待进一步阐明。研究方法:1、以POP患者和对照组患者各30例为研究对象,采集废弃的阴道壁组织,利用HE染色、Masson染色观察组织中病理学改变和胶原沉积状况;利用TUNEL染色观察凋亡情况;通过Western blot技术检测组织中凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达;通过免疫组织化学和Western blot检测组织中CKIP-1、TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III蛋白表达;分离培养阴道壁成纤维细胞,利用细胞转染技术,过表达以及敲低CKIP-1,通过Western blot检测TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III以及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达。2、RT-PCR检测组织中mi R-98-5p的表达,并与CKIP-1的表达进行相关性分析。利用细胞转染技术,过表达以及敲低mi R-98-5p,通过Western blot检测CKIP-1、TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III、Bax和Bcl-2的表达。设计mi R-98-5p mimics与ov-CKIP-1共转染阴道壁成纤维细胞,通过Western blot检测CKIP-1、TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III、Bax和Bcl-2的表达。3、RT-PCR检测组织中Lnc RNA NEAT1的表达,并与mi R-98-5p表达进行相关性分析。利用细胞转染技术,过表达以及敲低Lnc RNA NEAT1,通过Western blot检测CKIP-1、TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III、Bax和Bcl-2的表达。设计NEAT1 inhibitor及mi R-98-5p inhibitor共转染阴道壁成纤维细胞,通过Western blot检测CKIP-1、TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III、Bax和Bcl-2的表达。结果:1、Masson染色结果表明POP组胶原纤维断裂不连续,紊乱而疏松,而对照组患者胶原纤维排列紧密有序,POP组胶原纤维含量显著降低;TUNEL染色结果表明POP组细胞凋亡率增加;Western blot检测显示POP组中凋亡蛋白Bax表达较高、Bcl-2表达较低;POP组阴道壁组织中CKIP-1表达高于对照组,而TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III表达低于对照组;过表达CKIP-1后成纤维细胞TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III和Bcl-2表达降低,Bax表达升高;敲低CKIP-1后,成纤维细胞TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III和Bcl-2表达升高,Bax表达降低。2、POP组阴道壁组织中mi R-98-5p表达低于对照组,mi R-98-5p与CKIP-1表达呈负相关。过表达mi R-98-5p后,成纤维细胞TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III和Bcl-2表达升高,CKIP-1、Bax表达降低。敲低mi R-98-5p后,成纤维细胞TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III和Bcl-2表达降低,CKIP-1、Bax表达升高。当mi R-98-5p mimics与ov-CKIP-1共转染细胞后,CKIP-1回调了mi R-98-5p mimics的结果,成纤维细胞TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III和Bcl-2表达降低,CKIP-1、Bax表达升高。3、POP组阴道壁组织中Lnc RNA NEAT1表达高于对照组,Lnc RNA NEAT1与mi R-98-5p表达呈负相关。过表达NEAT1后,成纤维细胞TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III和Bcl-2表达降低,CKIP-1、Bax表达升高。敲低NEAT1后,成纤维细胞TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III和Bcl-2表达升高,CKIP-1、Bax表达降低。将NEAT1 inhibitor及mi R-98-5p inhibitor共转染阴道壁成纤维细胞,mi R-98-5p inhibitor回调了NEAT1 inhibitor导致的结果,TGF-β1、Smad3、p-Smad3、COL-I、COL-III和Bcl-2表达降低,CKIP-1、Bax表达升高。结论:1、POP阴道壁组织中I型和III型胶原蛋白表达降低,凋亡水平增加,CKIP-1的高表达抑制了TGF-β1/Smad3信号通路,抑制了I型和III型胶原蛋白表达,使成纤维细胞凋亡增加。2、POP阴道壁组织中mi R-98-5p表达降低,与CKIP-1呈负相关,通过上调CKIP-1的表达,抑制了TGF-β1/Smad3信号通路,抑制了I型和III型胶原蛋白表达,使成纤维细胞凋亡增加。3、POP阴道壁组织中Lnc RNA NEAT1表达升高,与mi R-98-5p呈负相关,通过抑制mi R-98-5p上调CKIP-1的表达,抑制了TGF-β1/Smad3信号通路,抑制了I型和III型胶原蛋白表达,使成纤维细胞凋亡增加。