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目的:盆腔脏器脱垂（pelvic organ prolapse,POP）是一类由于各种原因导致盆底支持力量薄弱,从而造成盆腔脏器位置下降及引起盆底功能异常的一类疾病,POP患病率随着年龄增长显著增高,其虽为非致死性疾病,但其带来的社会、精神心理困扰不同程度的影响患者的生命质量。POP的发病机制目前尚不明确,手术治疗虽然可达到一定的治疗效果,但术后的复发率高,成为困扰临床学者的一个难题。目前,分子靶向治疗成为临床工作者们研究的热点,寻找有效的分子治疗靶点对POP的靶向治疗具有显著的临床意义。女性盆腔器官的支持结构主要包括盆底神经、肌肉、韧带和筋膜等结缔组织。结缔组织中的成纤维细胞可以分泌大量的细胞外基质（extracellular matrix,ECM）,其主要成分包含结构蛋白（胶原蛋白和弹性蛋白）、基质黏附分子（纤连蛋白和层粘连蛋白）以及蛋白多糖等。研究表明ECM分解会减弱支持结构的强度,有助于POP发展。因此,ECM的含量及功能异常是POP发展的分子和生化基础。微小RNA（micro RNA,mi RNA）是一种非编码RNA,长度约为22个核苷酸,它是内源性RNA分子,与靶信使RNA（messenger RNA,m RNA）的3’非翻译区的调控位点互补配对结合,从而导致翻译抑制或m RNA降解。mi R-5195-3p是于2011年在人类急性淋巴细胞白血病中通过小RNA组深度测序发现的。目前对其的研究主要集中在肿瘤领域,发挥抑癌作用。对于mi R-5195-3p对ECM代谢的调节作用及其在POP进程中的作用目前尚无报道。赖氨酰氧化酶（lysyl oxidase,LOX）家族是一种分泌型依赖铜的胺氧化酶,它催化赖氨酸和羟赖氨酸残基的氧化脱氨从而形成高度反应性的肽基半醛,这些肽基半醛缩合在一起形成分子内和分子间的键。从而促进ECM成分的分子内和分子间交叉连接的形成和组织特异性不可溶基质的发展,有助于ECM发挥其在发育、组织维护和修复以及各种病理过程中提供局部结构和信号环境、调节细胞的命运、粘附、增殖、分化、迁移和通讯的功能。LOX与转化生长因子β（transforming growth factorβ,TGF-β）具有相互调控作用。LOX表达下调能通过抑制TGF-β1/SMAD家族成员（SMAD family member,Smad）3/胶原通路导致滋养层细胞迁移和侵袭减少。在博来霉素诱导的特发性肺纤维化模型中,LOX表达上调,敲低LOX或抑制LOX能减轻肺纤维化,其机制与减少TGF-β信号传导和肌成纤维细胞积累相关。总之,本研究旨在探索mi R-5195-3p在POP发生中的作用,且主要探究其对POP患者阴道壁组织ECM代谢的影响,并进一步研究mi R-5195-3p与LOX间靶向关系及LOX/TGF-β信号通路在mi R-5195-3p调节POP患者阴道壁组织ECM代谢中发挥的作用,为POP治疗及诊断提供新思路。研究方法:1、探究mi R-5195-3p对POP患者ECM代谢的影响:收集POP及对照组患者阴道壁组织,利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,q RT-PCR）和荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）检测阴道壁组织mi R-5195-3p表达,应用免疫组化和Western blot检测阴道壁组织ECM代谢相关蛋白表达,分离POP及对照组患者阴道壁成纤维细胞并通过免疫荧光鉴定,将mi R-5195-3p抑制剂转染阴道壁成纤维细胞,应用q RT-PCR检测细胞mi R-5195-3p表达,使用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,利用Western blot和免疫荧光检测细胞ECM代谢相关蛋白表达。2、探究mi R-5195-3p是否通过靶向LOX影响POP患者ECM代谢:收集POP及对照组患者阴道壁组织,应用q RT-PCR检测阴道壁组织LOX m RNA表达,使用Western blot和免疫组化检测阴道壁组织LOX蛋白表达,分离POP及对照组患者阴道壁成纤维细胞,将LOX过表达质粒转染阴道壁成纤维细胞,q RT-PCR检测细胞LOX m RNA表达,应用Western blot和免疫荧光检测阴道壁组织LOX蛋白及ECM代谢相关蛋白表达,使用CCK-8检测细胞增殖,使用流式细胞术检测细胞凋亡,通过生物信息学网站预测mi R-5195-3p与LOX m RNA的3’非翻译区的潜在结合位点,并利用双萤光素酶报告基因实验验证,将mi R-5195-3p抑制剂转染阴道壁成纤维细胞,q RT-PCR检测细胞LOX m RNA表达,Western blot检测阴道壁组织LOX蛋白表达,使用CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,使用Western blot和免疫荧光检测阴道壁组织ECM代谢相关蛋白表达。3、探究mi R-5195-3p是否通过靶向LOX调节TGF-β1表达影响POP患者ECM代谢:收集POP及对照组患者阴道壁组织,应用Western blot检测阴道壁组织TGF-β1相关蛋白表达,分离POP患者阴道壁成纤维细胞,将mi R-5195-3p抑制剂或LOX过表达质粒转染阴道壁成纤维细胞,使用CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,应用Western blot检测TGF-β1信号通路相关蛋白在细胞中表达,应用Western blot和免疫荧光检测过表达TGF-β1后细胞内ECM代谢相关蛋白表达。结果:1、POP患者阴道壁组织中mi R-5195-3p和基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）1高表达,I型胶原蛋白（collagen I,COL1）、金属蛋白酶组织抑制因子1（tissue inhibitor of metalloproteinase 1,TIMP1）和细胞外基质蛋白2（extracellular matrix protein 2,ECM2）低表达,转染mi R-5195-3p抑制剂降低POP患者阴道壁成纤维细胞mi R-5195-3p和MMP1表达及凋亡率,增加细胞增殖活性及COL1、TIMP1和ECM2表达。2、LOX在POP患者阴道壁组织中低表达,转染LOX过表达质粒增加POP患者阴道壁成纤维细胞增殖活性及LOX、COL-1、TIMP1和ECM2表达,降低细胞凋亡率及MMP-1蛋白表达,mi R-5195-3p靶向结合LOX m RNA 3’非翻译区,并抑制LOX表达,转染LOX si RNA逆转了mi R-5195-3p抑制剂对POP患者阴道壁成纤维细胞增殖、凋亡及ECM代谢相关蛋白表达的影响。3、POP患者阴道壁组织中TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3蛋白低表达,且转染mi R-5195-3p抑制剂或过表达LOX增加POP患者阴道壁成纤维细胞TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达,转染LOX si RNA逆转了mi R-5195-3p抑制剂及过表达LOX对POP患者阴道壁成纤维细胞TGF-β1信号通路相关蛋白表达的影响,转染TGF-β1过表达质粒增加细胞增殖活性及COL-1、TIMP1和ECM2表达,降低细胞凋亡率及MMP-1表达,过表达TGF-β1逆转了转染LOX si RNA对POP患者阴道壁成纤维细胞增殖、凋亡及ECM代谢相关蛋白表达的影响。结论:Mi R-5195-3p通过靶向抑制LOX表达,抑制TGF-β信号通路,从而调节POP患者阴道壁组织ECM代谢失衡。