论文部分内容阅读
目的:1.探讨宫内缺氧对胎鼠及子代大鼠(1、3、6月)肝脏生长发育的影响。2.研究CCl4对宫内缺氧子代大鼠(6月)肝纤维化易感性的影响。方法:将大鼠从妊娠第4天至第20天(gestation day,GD4-20)放入缺氧环境饲养(O2浓度10±0.5%),建立大鼠宫内缺氧模型。实验分为两组:常氧对照组(简称对照组),宫内缺氧组(简称缺氧组)。检测两组中胎鼠(GD20)血气及血液离子指标;称量两组的胎鼠及子代大鼠(1、3、6月)的体重、肝脏重量,计算其肝比重;检测两组样品的血清生化指标,包括血清谷丙转氨酶(alanineaminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)的变化;分别对两组的肝脏进行HE染色后光镜下观察肝组织病理改变;Western-blot印迹法检测肝组织缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1, HIF-1α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)蛋白的表达。取6月龄雄性Sprague-Dawley(SD)子代大鼠随机分4组:正常子代组(n=15),缺氧子代组(n=15),正常子代+CCl4组(n=50),缺氧子代+CCl4组(n=50)。正常子代+CCl4组和缺氧子代+CCl4组均给予40%CCl4植物油混悬液腹腔注射,1ml/kg,3次/周,共计8周。正常子代组和缺氧子代组均给予同剂量的生理盐水腹腔注射,处理方法同上。分别于给药1、2、3、4、6、8周末随机取6只大鼠,同一时间点从正常子代组和缺氧子代组各取2只处死,称量体重、肝脏重量;分别对上述样本肝脏行HE染色和Masson胶原纤维染色,HE染色光镜观察肝组织改变,Masson胶原纤维染色光镜观察肝纤维化过程;Western-blot印迹法检测肝组织TGF-β1蛋白的表达。结果:1.大鼠宫内缺氧模型建立:与对照组相比,宫内缺氧降低胎儿血液中pO2和SO2%水平;而胎鼠血液中的pH、pCO2、Hb等指标没有明显的影响。2.与对照组相比,缺氧组胎鼠及1、3月龄子代大鼠血浆中ALT、AST有显著性差异,而6月龄子代大鼠无统计学意义;与对照组相比,缺氧组胎鼠的体重、肝重、肝比重有显著性差异;而1、3、6月龄子代大鼠无统计学意义。3.肝组织HE染色:与对照组相比,缺氧组胎鼠肝组织结构松散,肝细胞索排列紊乱,细胞质疏松化,细胞核相对较小。出生后1、3月龄缺氧组大鼠肝细胞索仍排列紊乱,细胞质中出现大量脂肪变性的空泡。6月龄时,肝细胞索排列有序,在中央静脉周围有少量肝细胞胞质出现脂肪变性的空泡。4.肝组织HIF-1α、 IL-6及TNF-α蛋白:与对照组相比,缺氧组胎鼠及1、3月龄子代大鼠肝组织中HIF-1α、IL-6和TNF-α的表达量明显增加。6月龄子代大鼠时,三种蛋白的表达量有增加,但无统计学差异。5.给予二次打击后子代大鼠肝比重的变化:正常子代+CCl4组和缺氧子代+CCl4组的肝比重从第4周开始,随着给药时间延长而增加,且缺氧子代+CCl4组在同一个时间点的肝比重显著高于正常子代+CCl4组。6.肝组织形态学变化:正常子代+CCl4组和缺氧子代+CCl4组均随着给药时间的延长,肝组织出现不同程度的损伤。HE染色光镜下可见,给药第1周缺氧子代+CCl4组有少量肝细胞脂肪变性,第4周肝脏形成假小叶。而正常子代+CCl4组直到第8周才出现假小叶。Masson染色光镜下可见,给药1周缺氧子代+CCl4组有少量胶原纤维分布在门管区,直到第4周肝组织中出现大量的胶原纤维,肝细胞出现大量的脂肪空泡;而正常子代+CCl4组直到第8周才出现上述形态学变化。7.肝组织中TGF-β1蛋白的表达:随着给药时间的延长,正常子代+CCl4组和缺氧子代+CCl4组肝组织中TGF-β1蛋白的表达量均增加,在同一个时间点缺氧子代+CCl4组TGF-β1的表达水平显著高于正常子代+CCl4组。结论:宫内缺氧导致了胎鼠供血供氧不足,胎鼠宫内生长受限,尤其是肝脏发育受限及肝脏组织结构发生病理改变。在低氧环境刺激胎鼠肝脏组织中HIF-1α的表达水平上调,激活了HIF-1α蛋白通路,导致机体内炎症因子TNF-α和IL-6的分泌增加,启动了子代肝脏发生炎症反应,这一过程可能促进肝星形细胞的活化。但在出生后6月龄子代大鼠的肝组织中出现部分性追赶生长,肝脏组织趋于正常。在宫内缺氧导致的肝脏生长发育非正常代谢的模式下采用CCl4二次打击,缺氧子代大鼠(6月龄)形成肝纤维化周期缩短,增加了子代大鼠(6月龄)肝纤维化的易感性。