论文部分内容阅读
目的：应用分子生物学及生物信息学方法,分别在前列腺癌细胞株PC-3及LNCap中检测IL-6(Interleukin-6)对程序性死亡因子PDCD4(programmed cell death4)表达的影响,探讨IL-6对PDCD4的靶向调节在前列腺癌发生及发展过程中的作用及机制,为前列腺癌,尤其是雄激素非依赖性前列腺癌的治疗提供新的思路和理论依据。方法：1、采用实时荧光定量PCR (Q-PCR)检测前列腺癌激素依赖性细胞(LNCaP)和激素非依赖性细胞(PC3)经IL-6不同浓度作用后PDCD4的表达。2、采用western blotting检测前列腺癌激素依赖性细胞(LNCaP)和激素非依赖性细胞(PC3)经IL-6不同浓度作用后PDCD4的表达。3、通过瞬时转染技术建立低表达miRNA-21的前列腺癌细胞系,采用Q-PCR和western blotting检测经IL-6作用后低表达miRNA-21的前列腺癌细胞(LNCaP、PC3)中PDCD4的表达。结果：1、本研究发现LNCaP细胞经不同浓度IL-6作用24h后,PDCD4在转录水平均有不同程度下调,经Shapiro—Wilk检验进行统计学分析,数据符合正态分布,运用oneway-ANOVA检验得出其差异具有统计学意义(F值=40.321,p<0.05),运用LSD检验进行组间两两比较得出：IL-6浓度为Ongml组、IL-6浓度为5ngml组与IL-6浓度为10ngml组三组间PDCD4表达差异有统计学意义(p<0.05),用Spearman检验得出PDCD4的表达与IL-6浓度呈负相关(R=0.967),显著性检验(p<0.05)。在PC3细胞中,前列腺癌细胞经不同浓度IL-6作用24h后,PDCD4在转录水平均有不同程度下调,运用on eway-ANOVA检验得出其差异具有统计学意义(F值=98.464,p<0.05),运用LSD检验进行组间两两比较得出：1L-6浓度为Ongml组、IL-6浓度为5ngml组与IL-6浓度为10ngml组三组间PDCD4表达差异有统计学意义(p<0.05),用Spearman检验得出：PDCD4的表达与IL-6浓度呈负相关(R=0.951),显著性检验(p<0.05)。结果说明：在前列腺癌细胞(PC3、LNCaP)中,IL-6在转录水平下调PDCD4的表达,并且PDCD4的表达量与IL-6的浓度呈显著负相关。2、IL-6对前列腺癌细胞中PDCD4在翻译水平表达的影响：研究发现LNCaP细胞经不同浓度IL-6作用24h后,PDCD4在翻译水平均有不同程度下调,运用oneway-ANOVA检验得出其差异具有统计学意义(F值=277.505,p<0.05),运用LSD检验进行组间两两比较得出：IL-6浓度为Ongml组、IL-6浓度为5ngml组与IL-6浓度为10ngml组三组间PDCD4表达差异有统计学意义(p<0.05),用Spearman检验得出：PDCD4的表达与IL-6浓度呈负相关(R=0.903),显著性检验(p<0.05)。在PC3细胞中,前列腺癌细胞经不同浓度IL-6作用24h后,PDCD4在翻译水平均有不同程度下调,运用oneway-ANOVA检验得出其差异具有统计学意义(F值=551.403,p<0.05),运用LSD检验进行组间两两比较得出：IL-6浓度为Ongml组、IL-6浓度为5ngml组与IL-6浓度为10ngml组三组间PDCD4表达差异有统计学意义(p<0.05),用Spearman检验得出PDCD4的表达与IL-6浓度呈负相关(R=0.946),显著性检验(p<0.05)。结果说明：在前列腺癌细胞(PC3、LNCaP)中,IL-6在翻译水平下调PDCD4的表达,并且PDCD4的表达量与IL-6的浓度呈显著负相关。3、前列腺癌细胞(PC3、LNCaP)低表达miRNA-21后,IL-6对PDCD4在转录和翻译水平表达的影响：为研究miRNA-21在IL-6对下调PDCD4表达过程中的作用,本实验通过转染anti-miR-21-inhibitor建立低表达miRNA-21的前列腺癌细胞系,然后再用浓度10ngml的IL-6作用24h,在LNCaP细胞中,我们发现转染anti-miR-21-inhibitor组中PDCD4在转录水平的表达明显升高,运用oneway-ANOVA检验其差异具有统计学意义(F值=241.781,p<0.05)；同时在翻译水平转染anti-miR-21-inhibitor组中PDCD4表达也明显升高,运用oneway-ANOVA检验分析得出其差异具有统计学意义(p<0.05)；运用LSD检验进行组间两两比较得出：未转染anti-miR-21-inhibitor组与转染anti-miR-21-inhibitor组中PDCD4表达差异有统计学意义(p<0.05)。在PC3细胞实验组中我们也得出相似结果：转染anti-miR-21-inhibitor组中PDCD4在转录水平的表达明显升高,运用oneway-ANOVA检验其差异具有统计学意义(F值=241.781,p<0.05)；同时在翻译水平转染anti-miR-21-inhibitor组中PDCD4表达也明显升高,运用oneway-ANOVA检验分析得出其差异具有统计学意义(p<0.05)；运用LSD检验进行组间两两比较得出：未转染anti-miR-21-inhibitor组与转染anti-miR-21-inhibitor组中PDCD4差异有统计学意义(p<0.05)。以上结果说明在前列腺癌细胞(PC3、LNCaP)中,低表达miRNA-21后,IL-6在转录及翻译水平下调PDCD4表达的作用减弱,提示了在前列腺癌中miRNA-21可能是IL-6调节PDCD4表达的中间环节。结论：1、在激素依赖型和非激素依赖型前列腺癌细胞(LNCaP PC3)中,IL-6在转录和翻译水平上均下调了PDCD4的表达,并且PDCD4的下调程度与IL-6作用浓度呈显著负相关2、当沉默了miRNA-21表达后,IL-6在转录和翻译水平上下调PDCD4表达的作用也随之减弱,这就揭示了在前列腺癌中miRNA-21可能是IL-6调节PDCD4表达的一个中间环节,即IL-6可能是通过作用于miRNA-21来调节PDCD4的表达。