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目的:
煤焦沥青(Coaltarpitch，CTP)是煤炭炼焦过程中所产生的副产品，广泛应用于工业生产中。CTP烟尘主要通过呼吸道和皮肤对机体造成毒性反应，能导致机体发生炎症反应，炎症反应能激活适应性免疫应答致肿瘤细胞的凋亡，也能促进细胞的恶性转化。正常情况下，炎症具有自限性，若炎症反应过度，促炎因素持续存在，转换为慢性炎症能招募大量炎症细胞分泌细胞因子与细胞外基质形成新的微环境。激活蛋白-1(ActivityProtein-1，AP-1)的活化是炎症细胞活化的早期标志，AP-1的表达增加与炎症细胞合成和释放炎症因子有关。
本课题通过建立人单核细胞(THP-1)与人支气管上皮细胞(ImmortalizedHumanBronchialEpithelialCell，BEAS-2B)共培养模型，模拟人体的炎症微环境，检测煤焦沥青烟提取物(CoalTarPitchSmokeExtracts，CTPE)刺激共培养细胞后BEAS-2B细胞中AP-1的表达，及阻断肿瘤坏死因子-α(TumorNecrosisFactor-α,TNF-α)和AP-1的表达后其下游介导的相关基因表达的变化，来探讨职业接触煤焦沥青烟导致机体发生慢性炎症的可能机制。
方法:
1.CTPE染毒THP-1细胞实验:CTPE刺激THP-1细胞24、48、72h，并设立空白对照组、二甲基亚砜(DimethylSulfoxide，DMSO)溶剂对照组。收集THP-1细胞及培养上清。利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-timefluorescentquantitativePolymeraseChainReaction，Real-timePCR)检测CTPE染毒不同时间点THP-1细胞TNF-αmRNA相对表达水平，酶联免疫吸附测定(EnzymeLinkedImmuno-sorbentAssay，ELISA)检测THP-1细胞培养上清中细胞因子TNF-α的表达水平。
2.CTPE染毒BEAS-2B与THP-1共培养细胞实验:设立DMSO溶剂对照组、CTPE组、BEAS-2B与THP-1细胞以30∶1比例共培养组（CC组），收集1、5、10、15、20代BEAS-2B细胞，采用Real-timePCR检测c-JunmRNA表达水平的变化。
3.TNF-α中和抗体和JNK激酶抑制剂对共培养组BEAS-2B细胞基因表达的影响:将CTPE染毒共培养组第9代细胞(CC9)分为4组，第1组长满收集BEAS-2B细胞，记为CC10组;第2组常规培养至15代，记为CC15组;第3组每代加入TNF-α中和抗体，终浓度为100tg/ml，记为中和抗体组;第4组每代加入JNK激酶抑制剂SP600125，终浓度为2.2μg/ml，记为SP600125组。中和抗体组和抑制剂组养至15代收集BEAS-2B细胞，同时同步培养一瓶正常BEAS-2B细胞作为空白对照组。应用Real-TimePCR检测各组细胞c-Jun、TRAF2、CyclinD1mRNA的相对表达水平。
结果:
1.THP-1细胞TNF-α的表达水平:结果显示CTPE刺激THP-1细胞72hTNF-α的mRNA和蛋白水平明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。
2.BEAS-2B细胞c-JunmRNA相对表达水平:按不同传代次数分组进行单因素方差分析，1代和5代CTPE组和CC组BEAS-2B细胞c-JunmRNA相对表达水平高于空白对照组和DMSO组，差异均有统计学意义(P＜0.05);10代、15代和20代细胞组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05），与正常对照组、DMSO组和CTPE组比较，CC组BEAS-2B细胞c-JunmRNA相对表达水平上调，差异均有统计学意义(P＜0.05)。
按不同处理因素分组进行单因素方差分析，CTPE组15代和20代BEAS-2B细胞c-JunmRNA相对表达水平高于1、5、10代细胞，差异均有统计学意义(P＜0.05);CC组20代BEAS-2B细胞c-JunmRNA相对表达水平高于1、5、10、15代细胞，差异均有统计学意义(P＜0.05)。
CTPE组和CC组BEAS-2B细胞c-junmRNA表达水平与细胞传代次数呈正相关（P＜0.05）。即随着细胞传代次数的增加，CTPE组和CC组BEAS-2B细胞c-JunmRNA表达水平随之升高，且CC组c-JunmRNA表达水平高于CTPE组。
3.中和抗体和抑制剂对共培养组BEAS-2B细胞c-Jun、TRAF2、CyclinD1mRNA相对表达水平的影响:
3.1TNF-α中和抗体对各组BEAS-2B细胞基因表达的影响:TNF-α中和抗体组c-Jun和CyclinD1mRNA相对表达水平均高于正常对照组和CCl0组，低于CCl5组BEAS-2B细胞，差异均有统计学意义（P＜0.05）;TNF-α中和抗体组TRAF2mRNA相对表达水平高于正常对照组，低于CCl5组细胞，差异均有统计学意义(P＜0.05)。
3.2JNK激酶抑制剂SP600125对各组BEAS-2B细胞基因表达的影响:SP600125组c-JunmRNA相对表达水平高于正常对照组，低于CCl5组BEAS-2B细胞，差异均有统计学意义(P＜0.05);SP600125组TRAF2和CyclinD1mRNA相对表达水平均高于正常对照组和CCl0组，低于CCl5组细胞，差异均有统计学意义(P＜0.05)。
结论:
THP-1细胞共培养可能对煤焦沥青烟提取物诱导BEAS-2B细胞炎症因子TNF-α和转录因子AP-1的表达发挥促进作用。