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目的:研究大蒜素(Allicin)联合顺铂(cisplatin,DDP)诱导黏液表皮样癌(Mucoepidermoid Carcinoma,MEC)细胞凋亡及对死亡受体相关蛋白表达的影响,为Allicin联合DDP应用于MEC临床化疗提供实验基础。方法:以MEC-1细胞株为研究对象,由预实验确定药物作用浓度梯度。Allicin浓度梯度为0、30.0、60.0、90.0、120.0、150.0、180.0 mg/L,DDP浓度梯度为0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 mg/L。(1)CCK-8试剂盒检测不同浓度的Allicin和DDP作用于MEC-1细胞24 h、48 h、72 h后增殖抑制率,并用SPSS21.0计算Allicin与DDP处理MEC-1 24 h半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);选取Allicin和DDP的1/4IC50、1/2IC50、IC50值以及两者联合作用于MEC-1细胞24 h,计算细胞增殖抑制率并用金正均Q值法判断两药联合作用效果,选取有协同作用效果的Allicin组、DDP组和联合组,进行后续实验分组。(2)采用85.5 mg/L Allicin、5.5 mg/LDDP及85.5 mg/L Allicin+5.5mg/LDDP联合作用MEC-1细胞,设置对照组为0.1%DMSO的PBS磷酸缓冲液,24 h后采用倒置显微镜观察各组细胞生长形态。(3)DAPI荧光染色检测各组作用MEC-1 24 h后,各组细胞核形态的变化。(4)流式细胞仪检测各组作用MEC-1 24h后,凋亡率的差异。(5)RT-q PCR检测各组作用MEC-1 24 h后,Fas、TRAIL、Caspase-8m RNA的表达量。(6)Western blot检测各组作用MEC-1 24 h后,Fas、TRAIL、Caspase-8蛋白的表达量。结果:(1)同一个时间点作用下,当Allicin与DDP浓度增加,MEC-1细胞增殖抑制率增加(P<0.05);同浓度的Allicin与DDP处理MEC-1后,细胞增殖抑制率随时间的延长而增加(P<0.05)。Allicin IC50值为171.0 mg/L,DDP IC50值为11.0 mg/L。分别单用Allicin浓度42.75 mg/L、85.5 mg/L、171.0 mg/L组和DDP浓度2.75 mg/L、5.5 mg/L、11.0 mg/L组、以及联合组浓度(42.75 mg/L+2.75 mg/L),(85.5 mg/L+5.5 mg/L)和(171.0 mg/L+11.0 mg/L)组,作用MEC-1 24 h后计算各组细胞增殖抑制率,Allicin联合DDP仅有(85.5 mg/L+5.5 mg/L)组通过金正均法计算q值为1.26大于1.15,两药联合具有协同作用效应。因此实验分为对照组,Allicin组(85.5 mg/L),DDP组(5.5 mg/L)以及联合组(85.5 mg/L+5.5mg/L)。(2)倒置显微镜下对照组MEC-1生长形态较好,速度较快,Allicin组、DDP组和联合组可见MEC-1生长速度明显缓慢,联合组较单一用药组细胞脱落情况更为明显。(3)DAPI染色结果显示对照组MEC-1未见明显凋亡形态,Allicin组、DDP组和联合组可观察到细胞凋亡的核形态,且联合组凋亡小体数量较Allicin和DDP组增加。(4)流式细胞术检测发现,Allicin组、DDP组和联合组均能诱导MEC-1细胞凋亡,联合用药组的凋亡率大于单独用药组(P<0.05)。(5)RT-q PCR结果发现,与对照组相比,Allicin与DDP单独及联合使用均可上调MEC-1细胞中Fas、TRAIL、caspase-8m RNA相对表达量,联合用药组对目的基因的调控最为显著(P<0.05)。(6)Western blot检测显示:Allicin组、DDP组、联合组的Fas,TRAIL,caspase-8蛋白表达量较对照组明显增加,联合组的蛋白表达量大于单一用药组(P<0.05)。结论:(1)Allicin与DDP均可抑制MEC-1细胞增殖活性,呈时间-浓度依赖性,两者联合具有协同作用;和单一用药组相比,Allicin联合DDP可增加MEC-1细胞的凋亡率。(2)Allicin协同DDP能诱导MEC-1细胞凋亡,其机制可能与死亡受体途径关键蛋白Fas,TRAIL,caspase-8表达上调有关。