【摘 要】
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铅黄肠球菌是常见的人畜共患条件致病菌,人工饲养的林麝感染后可导致肺炎,从而引起死亡。雅安汉源某人工养麝场于2018年4月爆发了一场死亡率高达70%的传染性肺炎。本研究从此次爆发传染性肺炎的病死林麝肺脏中分离出一株铅黄肠球菌,命名为FML1805。对此株FML1805进行生理生化鉴定和16S r RNA测序分析后,进行了小鼠致病性试验、全基因组测序分析及ANI计算分析,同时试制了蜂胶佐剂灭活疫苗。疫
【基金项目】
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“2017 年四川省科技厅四川省省级科研院所科技成果转化资金项目《人工养麝产业化示范基地建设与技术集成及推广应用》”（项目编号:2017YSZH0008）；
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铅黄肠球菌是常见的人畜共患条件致病菌,人工饲养的林麝感染后可导致肺炎,从而引起死亡。雅安汉源某人工养麝场于2018年4月爆发了一场死亡率高达70%的传染性肺炎。本研究从此次爆发传染性肺炎的病死林麝肺脏中分离出一株铅黄肠球菌,命名为FML1805。对此株FML1805进行生理生化鉴定和16S r RNA测序分析后,进行了小鼠致病性试验、全基因组测序分析及ANI计算分析,同时试制了蜂胶佐剂灭活疫苗。疫苗通过动物安全试验后分别注射家兔与林麝,并用间接ELISA方法检测家兔与林麝三免后84 d的血清抗体效价。主要试验结果如下:1.林麝肺源铅黄肠球菌的分离及致病性试验结合分离菌株的生化试验及16S r RNA的测定比对,死亡林麝肺脏分离菌株为肠球菌属,并且与铅黄肠球菌16S r RNA同源性最高;该分离菌株可以引起小鼠发病,剖检可见小鼠肺部病变较为明显、其余脏器也有不同程度充血肿大,制备病理切片后观察可发现:小鼠心、肝、脾、肺、肾均有不同程度组织病理变化。分离菌株对小鼠半数致死量为5.9×108CFU/m L;药敏试验结果显示分离菌株对万古霉素耐药、氨基糖苷类几乎耐药、头孢类敏感。2.全基因组序列测定及分析结果全基因组序列测定结果显示此分离菌株基因组大小为5321641 bp,包含6521个开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）。对其进行ANI分析计算后显示与Enterococcus casseliflavus EC20全基因组平均序列一致性达到了99.54%,可判断此分离菌株为铅黄肠球菌。将测得的全基因组数据成功上传至NCBI,命名为FML1805,登录号:WEKZ00000000;对全基因组分析结果显示含有18个与耐药相关的基因及16个与毒力相关的基因。3.蜂胶佐剂灭活疫苗的试制本研究用天然蜂胶作为佐剂研制灭活疫苗,通过动物安全试验后接种于家兔和林麝体内。间接ELISA测定家兔和林麝三免后84 d内的血清抗体水平,用测得阳性血清OD600nm值（P）比上阴性血清OD600nm值（N）大于等于2.1时的最小血清稀释倍数来表示血清抗体水平,结果显示:家兔在完成免疫程序84 d内的血清抗体效价稳定在3100倍左右;林麝在完成免疫程序84 d内的血清抗体效价稳定在1500倍左右。综上,本试验从林麝肺脏分离鉴定出一株革兰氏阳性球菌,命名为FML1805。测定并分析FML1805全基因组后确定此菌株为耐万古霉素的铅黄肠球菌变异株,并研究了此菌株的致病性和耐药机制。最后试制蜂胶佐剂灭活疫苗,为铅黄肠球菌的临床治疗及其预防工作取得了铺垫。
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