Frizzled9-Cre转基因小鼠的制作和解析以及Limb发育的细胞谱系分析

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Wnt信号通路在脊椎动物的个体发育,器官特化等过程中起着重要的作用。同样Wnt信号的细胞膜上受体Frizzleds(Fzds)在其间也扮演着重要的角色。作为神经系统的高级中枢的大脑,尤其皮质和海马的发育问题一直是研究的热点,但到目前为止其形成的分子机制还不是很清楚。另外,作为解释和研究body plan的另一个有力工具——limb的发育也一直备受关注,但在其三个轴向特化过程中的相互协调的分子机制还有待研究。为了深入研究这些潜在的问题,必须寻找一些有力的手段和工具。   我们在前期工作中发现,Wnt受体之一Frizzled9(Fzd9)特异性地表达在小鼠端脑medialwall of the cortex以及由此发育而来的海马结构中。鉴于Fzd9表达的特异性以及海马结构在神经系统的重要地位,我们用Fzd9的启动子驱动Cre的表达,制作了一个新的转基因小鼠Fzd9-Cre。在该转基因小鼠中,我们检测了Cre的时空表达情况,发现Cre动态地表达在发育中的大脑皮质和海马结构中。为了检测Cre的重组活性以及Fzd9阳性细胞的命运,我们用该转基因小鼠和ROSA26报告小鼠交配,发现Cre在上述位置都有很高的重组活性。因此,该转基因小鼠将是研究皮质和海马发育的有力工具。   同样,鉴于Frizzled10(Fzd10)在limb bud的特异表达,我们用Fzd10的动子驱动CreERTM的表达制作了可诱导的Fzd10-CreERTM转基因小鼠。为了更好的进行limb发育的细胞谱系分析,我们利用该转基因小鼠和ROSA26报告小鼠交配,通过在发育的不同时间点向腹腔注射Tamoxifen(TM)开启Fzd10阳性细胞中报告基因LacZ的表达,并且借助X-Gal染色的方法,追踪了相关细胞的命运。筛选出在E10.5天注射TM的前肢和E11.5注射TM的后肢,LacZ阳性细胞分别特异性的定位在digit4、5和limb的digit的最远端。而这些区域主要是暴露在极化区时间最长和最晚离开生发区的细胞所在的区域。同时,我们发现这些细胞主要参与了limb的结缔纽织、肌肉组织以及零星的指骨的发生,为我们后续的研究这些细胞的功能提供帮助。
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