转化生长因子β1对人肺腺癌细胞株A549及外周单个核细胞形态和细胞免疫功能的影响

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:tony569257
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[目的]探讨转化生长因子β1(transform growth factor-betal, TGF-?1)对人肺腺癌细胞株A549与外周单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)形态和细胞免疫功能的影响。[方法]体外培养人肺腺癌A549细胞株,稳定传代后,加入非小细胞肺癌患者外周血分离提纯增殖后的单个核细胞和不同浓度(2ng/ml、5ng/ml、1Ong/ml、20ng/ml)的TGF-?1共同培养,分别于培养3d、5d、8d时间点,倒置相差显微镜下观察A549细胞株与PBMCs细胞形态;流式细胞仪(flow cytometry, FCM)检测各组上清液中白介素-2(Interleukin-2, IL-2)、白介素-4(Interleukin-4, IL-4)、白介素-6(Interleukin-6, IL-6)、白介素-10(Interleukin-10, IL-10)、干扰素γ(interferon-gamma, IFN-γ)和肿瘤坏死因子(tumor Necrosis Factor, TNF)浓度以及PBMCs中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和CD3+CD25+、 CD4+CD25+细胞数量。[结果]1.原代人肺腺癌A549细胞呈现鹅卵石样,细胞紧密连接生长形态,加入TGF-β1与PBMCs细胞后A549细胞形态拉长,形成梭形、细胞间隙变大,细胞间呈连接松散生长形态,随TGF-?1浓度增加和作用时间延长,细胞形态差异越大。2.分离后的PBMCs细胞呈现悬浮团簇样细胞岛生长方式,加入TGF-β1后与A549混合培养中转变为片状单个淋巴单个孤立悬浮生长,提前出现片状漂浮样凋亡细胞。随TGF-β1浓度增加和作用时间延长,其效应增加。3.TGF-β1(2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml)组在3d、5d、8d时间点,对A549上清液细胞因子浓度的影响:TGF-β1组较未加TGF-β1组中肺癌细胞株Th1因子:IL-2、TNF、IFN-γ浓度下降(P<0.05);对Th2因子:IL-4、IL-10浓度上升(P<0.05);在一定范围内TGF-β1浓度越高,作用时间越长,其效应增强。IL-6浓度与TGF-β1浓度水平和作用时间较未加TGF-β1组无明显相关性(P>0.05)。4.TGF-β1(2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml)组在3d、5d、8d时间点,对PBMCs中免疫细胞数量的影响:TGF-B1组较未加TGF-B1组PBMCs中CD3+、CD4+、CD8+、和CD3+CD25+细胞比例明显上升(P<0.05);TGF-β1组CD4+CD25+细胞比例较未加TGF-β1组显著上升(P<0.01),在一定范围内TGF-?1浓度越高,作用时间越长,其效应越强。[结论]1TGF-?1在PBMCs与肺腺癌细胞株共同培养过程中,TGF-β1刺激肺腺癌细胞表现出上皮细胞间充质转化改变,使肺腺癌细胞迁移侵袭能力增强;同时TGF-B1抑制PBMCs生长和增殖,抑制T淋巴细胞活化,加速PBMCs凋亡。2TGF-β1能抑制肺腺癌细胞株Th1因子,促进Th2因子,导致Th1/Th2因子失调,从而引起由Th1细胞免疫为主的免疫功能下降。3TGF-β1可能通过影响相关细胞因子分泌,从而阻碍T淋巴细胞活化,破坏机体免疫监视和免疫杀伤作用,从而抑制机体细胞免疫。
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