褐飞虱NlApoD基因的分子生物分析

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褐飞虱是我国水稻上重要的害虫,属于半变态昆虫。载脂蛋白-D(ApolipoproteinD,ApoD)是脂质运载蛋白家族(Lipocalin family)中的一员,属于分泌性蛋白,能够转运疏水性的配体。载脂蛋白-D过量表达可延长果蝇寿命,增加果蝇对氧化过激的抵抗力,同时提高行走和飞行能力。但ApoD在不完全变态昆虫中是不是有类似功能还不清楚。本研究以褐飞虱cDNA为模板,通过PCR克隆获得褐飞虱的N1ApoD基因,大小为819bp,可编码含272个氨基酸残基的蛋白,预测分子量为29.3kDa。通过原核表达,回收蛋白制备了N1ApoD蛋白的多克隆抗体。qRT-PCR分析表明N1ApoD基因在褐飞虱的五个若虫龄期内均有表达,且表达量逐渐升高,5龄若虫体内表达量达到最高,但N1ApoD基因在褐飞虱的成虫体内几乎不表达;N1ApoD基因在唾液腺,体壁,翅芽,足,消化道,脂肪体各组织内均有表达,但在翅芽和体壁表达量最高。进一步对N1ApoD基因在若虫4龄和5龄龄期内的表达动态进行了分析,结果显示N1ApoD基因在各龄期中间时的表达量最高,表达量随每次蜕皮前后呈周期性变化。免疫荧光定位实验证明,N1ApoD基因在褐飞虱体内各组织内均有表达,在体壁和翅芽内表达量较高。对褐飞虱3龄第一天的若虫进行显微注射dsN1ApoD, mRNA可被有效下调,褐飞虱5龄若虫的翅芽均呈现不同程度的畸形发育,且体壁和翅芽不能正常黑化;4龄和5龄褐飞虱不能正常蜕皮,且dsN1ApoD处理的褐飞虱不能发育为成虫。本结果首次发现了褐飞虱载脂蛋白对昆虫蜕皮,及体壁和翅芽黑化等功能具有重要影响,为进一步研究昆虫载脂蛋白打下基础;同时,利用RNAi技术成功干扰基因表达,褐飞虱不能正常蜕皮及翅芽畸形,可以作为褐飞虱防治的潜在靶标基因,这对褐飞虱的迁飞和防治都具有潜在价值。
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