目的:阿霉素是乳腺癌治疗的经典药物之一,由于其化疗抵抗及高剂量毒性反应,导致其疗效欠佳。本研究拟探讨Pin1在逆转乳腺癌耐药中的作用,并初步探讨Pin1调节Akt信号通路激活的机制。方法:本研究以人类乳腺癌细胞株MCF-7以及乳腺癌阿霉素耐药株MCF-7 ADR细胞系为研究对象。通过Western blot检测检测Pin1在乳腺癌细胞株及耐药株中的表达。通过Si RNA转染乳腺癌细胞株及耐药株敲低Pin1后,利用MTT、克隆形成及EdU实验观察Pin1对乳腺癌细胞生长、增殖及化疗耐药性的影响。通过Western blot检测探究Akt信号通路及MDR-1表达的变化。利用免疫共沉淀方法,验证Pin1与Akt的相互作用。运用泛素化实验探究Pin1对Akt泛素化的影响。构建Pin1敲除慢病毒稳转细胞系,皮下注射建立BALB/c裸鼠移植瘤模型,体内探究Pin1对肿瘤生长的影响。结果:(1)Pin1在乳腺癌耐药株MCF-7 ADR中的表达明显高于乳腺癌细胞株MCF-7。免疫组织化学显示Pin1在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织。Kaplan-Meier分析表明,Pin1高表达者的总生存期明显短于Pin1低表达者。(2)敲低Pin1可抑制细胞增殖、增加细胞凋亡,并且降低IC50,逆转了乳腺癌细胞对阿霉素的耐药。(3)Western blot检测显示Pin1通过Akt/mTOR信号通路调节MDR1表达进而逆转乳腺癌耐药。(4)Pin1与Akt相互作用,且调节p-Akt的表达但不改变Akt的丰度;通过泛素化实验检测Akt泛素化水平在Pin1敲除的细胞中显著降低。提示Pin1通过泛素化调节Akt的磷酸化和活化。(5)体内实验证实了敲除Pin1抑制肿瘤的生长。结论:通过以上研究我们发现,Pin1在乳腺癌中表达上调且与耐药、预后不良相关,敲除Pin1可通过Akt/mTOR信号通路调节MDR1表达进而逆转乳腺癌耐药。且Pin1与Akt结合,通过泛素化调节Akt的磷酸化和活化。因此,本研究提示抑制Pin1的表达可能是逆转乳腺癌耐药的一种治疗策略。