【摘 要】
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目的:以p38MAPK信号通路作为研究CIRI炎症级联反应的靶点,通过观察各组大鼠m NSS评分、脑组织含水量、脑梗死面积及病理形态学改变,检测目的蛋白及炎症因子表达,观察益气通脉方对CIRI大鼠的治疗效果,探讨益气通脉方治疗CIRI的作用机制。研究方法:（1）实验分组:采取数字表法将SD雄性大鼠随机划分为假手术组、模型组、益气通脉方低剂量组、益气通脉方中剂量组、益气通脉方高剂量组、银杏叶片组,每
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目的:以p38MAPK信号通路作为研究CIRI炎症级联反应的靶点,通过观察各组大鼠m NSS评分、脑组织含水量、脑梗死面积及病理形态学改变,检测目的蛋白及炎症因子表达,观察益气通脉方对CIRI大鼠的治疗效果,探讨益气通脉方治疗CIRI的作用机制。研究方法:（1）实验分组:采取数字表法将SD雄性大鼠随机划分为假手术组、模型组、益气通脉方低剂量组、益气通脉方中剂量组、益气通脉方高剂量组、银杏叶片组,每组12只。（2）运用线栓改良法制作大鼠左侧大脑中动脉阻塞模型,2h后拔出线拴头端约1cm,恢复大鼠左侧脑部供血,形成缺血再灌注。假手术组只备皮后剥离血管,不进行线栓插入。（3）参照Zea-Longa′s五分法评分标准,筛选符合标准的大鼠模型。亦舍弃线栓推入深度未达标记点或出血过多大鼠。（4）灌胃给药1次/日,于MCAO后24h行首次给药,参照人类标准体质量与大鼠标准体质量体表面积折算的等效剂量比值,换算得出益气通脉方低剂量组270mg·kg-1、益气通脉方中剂量组540mg·kg-1、益气通脉方高剂量组1080mg·kg-1、银杏叶片组680mg·kg-1,假手术组大鼠与模型组大鼠分别予以同等剂量的生理盐水。（5）记录大鼠m NSS评分、测算大鼠脑含水量及脑梗死面积、通过观察HE染色图片判断大鼠缺血脑组织检测区域的病理形态改变,ELISA法测定大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β表达量,WB法检测大鼠脑组织p38、p-p38、MK2、p-MK2蛋白表达量。研究结果:（1）缺血再灌注模型评价:MCAO大鼠造模成功率约为63.8%。（2）大鼠m NSS神经功能评分比较:各时间点假手术组均无神经功能损伤的表现,剩余手术各组均存在程度不一的神经功能缺损,随着给药时间的增加,药物治疗组大鼠神经功能评分相比模型组大鼠明显降低。大鼠m NSS神经功能评分结果表明,益气通脉方组及银杏叶片组均能改善脑缺血再灌注大鼠神经功能评分,而益气通脉方高剂量组治疗效果高于其他各组。（3）各组大鼠脑含水量比较:与假手术组大鼠相比,模型组大鼠的脑部含水量显著上升（aP＜0.01）;与模型组大鼠相比,益气通脉方低、中、高及银杏叶片组大鼠脑含水量明显降低（bP＜0.01）;大鼠脑含水量测定结果表明,益气通脉方组及银杏叶片组均能改善脑缺血再灌注大鼠脑含水量,而益气通脉方高剂量组效果最佳。（4）WB检测缺血脑组织蛋白表达情况:与假手术组大鼠相比,模型组大鼠脑组织目标蛋白磷酸化均显著升高（aP＜0.01）;与模型组大鼠相比,益气通脉方低、中、高剂量组及银杏叶片组大鼠脑组织目标蛋白磷酸化均显著降低（bP＜0.01）,WB结果表明,益气通脉方各组及银杏叶片组均能下调脑缺血再灌注大鼠脑组织目标蛋白的磷酸化,而益气通脉方高剂量组作用效果较明显。（5）ELISA检测缺血脑组织TNF-α、IL-β表达水平:与假手术组大鼠相比,模型组大鼠的脑组织中TNF-α、IL-1β表达水平上调,差异具有显著性（P＜0.01）;与模型组大鼠相比,益气通脉方低、中、高剂量组及银杏叶片组大鼠脑组织TNF-α、IL-1β表达水平降低（P＜0.05,P＜0.01）;ELISA结果表明,益气通脉方各组及银杏叶片组均能有效降低CIRI大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β的含量,而益气通脉方高剂量组抑制炎症因子作用较显著。结论及意义:（1）造模大鼠神经功能缺损明显、精神萎靡、体重下降,表明成功应用MCAO法制备大鼠CIRI模型。（2）益气通脉方可通过调控p38MAPK信号通路,抑制其下游靶点MK2蛋白的磷酸化,从而抑制p-MK2所介导的TNF-α、IL-1β炎性因子的表达,因此益气通脉方可能作用机制是通过干预炎症因子而降低CIRI大鼠脑损伤。（3）益气通脉方可有效干预CIRI大鼠脑组织中炎症因子所诱导的瀑布式级联反应,并抑制TNF-α、IL-1β表达,降低CIRI大鼠神经功能评分、脑含水量及脑梗死百分比,从而显著改善CIRI大鼠神经功能缺损及脑组织缺血半暗带损伤。（4）相较于银杏叶片组大鼠,益气通脉方高剂量组对脑缺血再灌注损伤的治疗效果更为显著且复方疗效与其浓度呈正相关。
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