【摘 要】
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该研究利用pET-5a原核表达载体成功地在大肠杆菌中表达出PRRSV BJ-4ORF基因编码的M蛋白.用RNA提取试剂盒提取PRRSV BJ-4基因组总RNA,用两对引物经RTPCR,特异性扩增出PRRSV BJ
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该研究利用pET-5a原核表达载体成功地在大肠杆菌中表达出PRRSV BJ-4ORF<,6>基因编码的M蛋白.用RNA提取试剂盒提取PRRSV BJ-4基因组总RNA,用两对引物经RTPCR,特异性扩增出PRRSV BJ-4 ORF<,6>-1、ORF<,6>-2cDNA片段,经酶切鉴定后将其克隆到pGEM-T easy载体上,筛选并鉴定出阳性克隆以后,进行序列测定,结果表明PRRSV BJ-4的ORF<,6>-1、ORF<,6>-2基因片段被正确克隆到pGEM-T easy载体上.克隆的质粒经酶切、纯化并回收目的片段,将其连接到pET-5a、pGEX-4T-2和pBV220表达载体上,构建出4种重组表达质粒pET5-ORF<,6>-2、pGEX4T-ORF<,6>-1、pBV220-ORF<,6>-1、pBV220-ORF<,6>-2,经特异性酶切鉴定和质粒PCR鉴定为正确后,将其分别转化BL<,21>(DE<,3>)、BL<,21>、DH<,5a>感受态细胞.其中pET5-ORF<,6>-2重组表达质粒经诱导后,其细胞裂解经SDS-PAGE可检测到分子量约为19KD的目的蛋白.经Kodas凝胶成像分析系统分析,目的蛋白占菌体总蛋白的26.8﹪.采用重组菌裂解蛋白做为包被抗原进行ELISA检测,结果表明表达的蛋白是特异性的.
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