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心肌缺血再灌注损伤（myocardial ischemic and reperfusion，MI/R）作为心脏疾患普遍存在的现象，有着极其重要的病理生理意义，其在缺血性心脏病、心脏外科中愈来愈受到重视。但至今MI/R损伤的发病机制仍未彻底阐明。活性氧（reactive oxygen specie，ROS）损伤和细胞内钙超载是目前公认MI/R损伤的发病机制中的中心环节，两者有着深刻的内在联系。新近研究表明，肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）在MI/R损伤的发生发展中起到重要作用。抗TNF-α疗法可能会给临床上MI/R损伤的防治提供新的思路。然而MI/R时心肌如何产生TNF-α的机制至今尚未阐明。丝裂素活化蛋白激酶（mitogen-activated proteinkinase，MAPK）是一个重要的细胞内信号传导激酶超家族，介导了多种细胞的生理病理过程。MAPK蛋白激酶家族包括四个亚族：ERK，p38MAPK，JNK和ERK5/BMK1，它们均存在于心肌细胞内，构成了极为复杂的调节通路。近年来，大量的工作证实MAPK是MI/R信号传导通路的重要步骤。我们以前的研究表明定心方（dingxinrecipe，DXR）具有保护缺血再灌注损伤的作用，但其作用机制尚不清楚。因此，本工作拟探讨ROS、TNF-α和MAPK在MI/R损伤的发病机制中的作用及其功能的联系，研究临床经验方DXR防治MI/R损伤的作用机制，为其临床应用提供理论和实验依据。首先建立大鼠心肌缺血再灌注模型，从整体水平上探讨MI/R损伤的发病机制以及DXR的作用机制。其次，利用心肌细胞ROS损伤模型和中药血清药理学方法，研究定心方药物血清对H2O2致培养心肌细胞损伤的影响。最后，探讨H2O2能否直接诱导心肌细胞表达TNF-α以及其生成可能的信号传导机制。结果表明：缺血再灌注导致明显的心肌损伤作用，主要表现为心律失常，平均动脉压（meanarterial pressure，MAP）的显著下降，血清中罕酸脱氢酶（lacticdehydrogenase，LDH）活性明显升高。同时，，0肌中TNF－a含量显著增力，心肌中谷jA甘肽过氧化物酶（glutathioneperoxidase，GSH－Px）活性显著降低和大量的脂质过氧化物（malondaldehyde，MDA）生成，心肌p38 MAPK活性增高。用TNF心抗体减少心肌中TNFa的含量对心肌有明显的保护作用。DXR能显著减少心肌MDA和TNFa的含量，提高GSHPX活性，抑制p38 MAPK活性。DXR药物血清对H。O。致心肌细胞损伤有明显的保护作用。H尸；以呈浓度依赖和时间依赖性的方式诱导心肌细胞表达T－NFa，而用蛋白激酶p38 MAPK抑制剂SB203580或将抑制核转录因子＊uclear factor kappa B，NF十B)活性的 I。B质粒转染心肌细胞，它们均能够显著减少TNF－a的生成。 本研究得出以下结论：ROS、TNF－a以及MAPK在MI／R损伤的发病机制中起着重要作用，而且三者有着深刻的内在联系。DXR可通过抗氧化作用、减少TNF心生成以及调节细胞内p38 MAPK信号传导通路以防治MI／R损伤。缺血再灌注诱导心肌生成TNFa的信号传导机制可能是 MI／R产生大量ROS(如 H；O／，Hp。启动细胞内 p38 MAPK信号传递通路和直接激活NF－。B，进一步调控TNF．a的基因表达和转录及其蛋白质的合成。