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我国贝类养殖产业迅速发展的同时,出现了一系列病原体入侵引起的健康问题,严重制约着海洋生态的可持续发展。挖掘贝类响应病原菌胁迫的关键因子,可为贝类的免疫防御机制研究提供可靠的数据支撑,同时对养殖过程中的疾病控制和健康管理具有十分重要的理论意义。本论文在菲律宾蛤仔中克隆出两种免疫相关分子——C型凝集素(VpClec-1、VpClec-2),对其序列进行分析;利用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR),对两种C型凝集素在菲律宾蛤仔中的组织分布特性进行研究;构建相应的重组蛋白,并对其免疫活性进行具体探究,得到研究结果如下:(1)基因序列分析结果显示,菲律宾蛤仔VpClec-1基因cDNA序列的全长为588 bp,开放阅读框(ORF)为489 bp,编码162个氨基酸,等电点为pI=4.26,蛋白预测分子量为15.98 kDa;VpClec-2基因cDNA序列的全长为688 bp,ORF为555 bp,编码184个氨基酸,等电点为p I=8.40,蛋白预测分子量为18.74 kDa。对VpClec-1和VpClec-2基因的氨基酸序列进行同源性分析、多序列比对,发现两种基因均与C型凝集素序列和结构特点相似,是C型凝集素家族的新成员。(2)qRT-PCR结果显示,VpClec-1和VpClec-2基因在菲律宾蛤仔血淋巴细胞、肝胰腺、鳃、外套膜、肌肉中均有表达。在鳗弧菌刺激菲律宾蛤仔后,VpClec-1和VpClec-2基因的mRNA表达量均表现为上调,其中VpClec-1基因表达量在鳗弧菌刺激后明显上调,24 h达到峰值;而VpClec-2在刺激后6 h(8.25倍,p<0.01)、12 h(16.7倍,p<0.01)和24 h(24.2倍,p<0.01)出现急性上调,二者均在48 h接近于正常水平。表明VpClec-1和VpClec-2基因参与了菲律宾蛤仔抵抗病原微生物入侵的免疫应答过程。(3)构建的重组蛋白rVpClec-1和rVpClec-2都能识别和结合脂多糖、葡聚糖和酵母多糖等配体,且结合能力呈剂量依赖性;rVpClec-1和rVpClec-2均显示出对哈维氏弧菌、灿烂弧菌、鳗弧菌、阴沟肠杆菌和嗜水气单胞菌的强凝集活性,而对金黄色葡萄球菌没有明显的凝集活性。与rVpClec-2相比,重组蛋白rVpClec-1显示出对鳗弧菌、阴沟肠杆菌和嗜水气单胞菌更强的抑菌/凝集活性,但对金黄色葡萄球菌和灿烂弧菌则没有;此外rVpClec-1和rVpClec-2均能显著提高血淋巴细胞的吞噬作用,尤其是rVpClec-2具有明显的诱导血淋巴细胞吞噬活性的能力,而rVpClec-1可促进血淋巴细胞的趋化能力,r VpClec-2则对其趋化能力没有明显作用;同时rVpClec-1和rVpClec-2也可促进血淋巴细胞的包囊化能力,这表明在菲律宾蛤仔固有免疫反应中二者都具有一定的免疫调节作用。综上,菲律宾蛤仔凝集素VpClec-1和VpClec-2作为模式识别受体,在菲律宾蛤仔免疫防御过程中发挥不可或缺的作用,研究结果为深入了解贝类固有免疫防御机制提供了一定的理论支持。