白藜芦醇是一种植物抗毒素，具有抗菌、抗氧化、保护心血管、抗癌等许多药理作用。现已被广泛应用于食品、医药、保健品等行业。目前生产白藜芦醇还主要是植物提取法，但在自然条件下，植物体内白藜芦醇的含量很低，限制了白藜芦醇的产量。所以利用现代生物技术生产白藜芦醇逐渐受到人们的重视。由于酿酒酵母具有生长速度快、对培养基要求低并且生产过程中不产生毒素等优点，利用重组酿酒酵母生产白藜芦醇是一条有效途径。 但由于酿酒酵母体内缺少白藜芦醇生物合成过程中的另一关键酶，4-香豆酸：辅酶A连接酶(4CL)。所以应首先将4CL基因通过基因工程手段转化入酿酒酵母细胞。 本研究利用TRIzol法获得拟南芥总RNA，通过RT—PCR法克隆出4-香豆酸：辅酶A连接酶基因(4CL)cDNA序列，并构建了重组穿梭载体pESC-HIS-4CL。用pESC—HIS-4CL转化大肠杆菌DH5α后，通过氨苄青霉素抗性筛选出重组大肠杆菌。提取重组大肠杆菌中的质粒后，通过PCR和双酶切鉴定，对其进行序列测定并将测序结果和NCBI中登陆号为NM001084228.1的4CLcDNA序列比对，同源性为99％。证明4CL基因已成功克隆至pESC—HIS载体中。 利用氯化锂法将重组穿梭载体pESC-HIS-4CL转化入酿酒酵母中，通过SD组氨酸营养缺陷培养基筛选出转化子。提取转化子中的质粒，进行PCR鉴定和双酶切鉴定，结果表明已成功将pESC-HIS-4CL转化入酿酒酵母。