论文部分内容阅读
目的:目前研究中,microRNA (miRNA)成为一大热点,miRNA是一类非编码的单链小RNA分子,长约19-25nt. miRNA与它的靶基因(?)mRNA的3’非编码区结合,使靶基因mRNA降解或抑制靶基因的翻译,从而调控真核生物转录后水平的基因表达。很多研究显示,(?)(?)iRNA广泛参与很多重要生命过程的调控,比如调控细胞的增殖、分化、凋亡等。目前,越来越多的研究证实miRNAs与多种肿瘤发生之间的相关性。在与HBV相关的肝癌的发展过程中,(?)niRNAs也扮演着非常重要的角色,但在这方面还有待进一步更深的研究。本课题组前期通过miRNA芯片研究发现,miR-29c在BEL7402-1.1HBV细胞系与HBV转基因小鼠肝脏中的表达水平明显降低,由此显示(?)niR-29c与其调控的靶基因可能对HBV相关肝癌的发生发展有调控作用,miR-29c与HBV感染和肝癌的关系有重要研究意义。方法:本课题在前期基因芯片结果的基础上,利用生物信息学的方法,通过双荧光检测方法,明确了TNFAIP3为miR-29c的靶基因之一。利用肝癌细胞系HepG2和HepG2.2.15,并收集相应临床标本,观察HBV转染前后miR-29c及TNFAIP3的变化。将(?)-niR-29c表达载体进行体外转染,测定在mRNA与蛋白水平上,靶基因TNFAIP3的表达变化,研究miR-29c在HBV复制和抗原表达过程中的作用,并了解肝癌细胞系在生物学功能上的变化。通过这些研究,明确了miR-29c与HBV相关肝癌的作用关系,阐明miR-29c对HBV相关肝癌发生发展过程的调控作用及其作用机制。miR-29c对抑制HBV感染和预防肝癌的发生有重要的调控作用,对miR-29c的开发也为临床治疗水平的提升提供了良好的理论依据。结果:通过生物信息学方法及双荧光检测结果分析,证实TNFAIP3为miR-29c的靶基因之一,miR-29c抑制TNFAIP3基因的表达,qRT-PCR结果显示,miR-29c在肝癌细胞系HepG2.2.15中,与肝癌细胞系HepG2相比,表达下调。(?)miR-29c在肝癌细胞系HepG2.2.15中过表达,对其靶基因TNFAIP3在mRNA和蛋白水平的表达有显著的抑制作用,同时,明显抑制HBV DNA复制,及HBsAg与HbeAg的表达,证实(?)miR-29c转染可以抑制肿瘤细胞的生长,对肿瘤细胞的凋亡起到明显促进作用。结论:通过以上研究结果显示,可能是因为miR-29c与其靶基因TNFAIP3的相互作用,参与了HBV相关肝癌的发生和发展,它与其靶基因对抑制HBV感染和防止肝癌的发生有重要的调控作用。病毒侵入宿主机体,产生miRNAs,这些miRNAs可以抑制宿主细胞的相应靶基因,表现出致病作用。相反,宿主细胞的miRNAs也可以作用于病毒的相应序列,抑制病毒的复制和增殖,抵抗病毒感染,同时,宿主细胞的miRNAs也可以抑制宿主靶基因的表达,导致相关病理变化。miR-29c是抑制HBV感染和防止肝癌发生的重要调控分子,具有潜在的开发价值,本实验对探索防止HBV感染以及延缓肝癌发生的新策略有很大帮助,为临床上预防和治疗疾病提供了理论依据和实验支持。