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帕金森病(Parkinsons disease,PD)是最常见的神经退行性疾病之一,其发病率仅次于阿尔茨海默症。典型的临床表现为静止性震颤、肌肉强直、运动迟缓、姿势步态异常等。以黑质致密区多巴胺能神经元丢失及多巴胺能神经递质缺乏为主要病理表现。此外在存活的神经元中发现嗜酸性蛋白的沉积,形成Lewy小体也是其突出病理改变之一。大多数PD患者为散发病例,仅10%左右的PD患者有家族聚集现象。对PD的发病机制研究较多,但至今仍不完全明确,多认为环境及遗传易感性相互作用导致了PD的发病。在PD动物模型及PD病人尸检中发现了氧化应激、线粒体功能障碍、泛素蛋白降解系统异常、内环境钙失衡及炎症的相关证据,提示这些变化参与了PD的发病。形态学研究显示PD患者的神经元丢失主要有以下几种形式:凋亡、坏死、自噬。超微结构观察PD患者的黑质区神经元内发现有凋亡及自噬发生的证据。
BAG(Bcl-2 associated athanogene)蛋白家族是在研究Bcl-2促进细胞存活过程中的协同作用蛋白时发现,故而得名。该家族蛋白是一类进化相对保守的家族蛋白,其各成员蛋白分子的C-末端至少含有一个保守的BAG结构域。该家族成员蛋白的功能多样化,能参与执行多种生理功能,包括凋亡、肿瘤发生、神经分化、应激及细胞周期。在多种恶性肿瘤疾病中发现BAG家族蛋白的表达有上调,促进细胞存活。研究认为BAG家族蛋白能通过与Hsc70/Hsp70或bcl-2相互作用起到抗凋亡作用。另外,有研究显示BAG2蛋白参与调节tau蛋白的非泛素依赖蛋白酶体降解。Kalia等研究发现BAG5蛋白通过Hsp70与CHIP相互作用能调节a-突触核蛋白(a-synuclein)的寡聚化。本课题组前期研究发现BAG5蛋白通过调节PINK1能起到稳定线粒体作用提示BAG家族蛋白与神经退行性疾病有重要的联系。
雷沙吉兰是一种新型治疗PD药物,是一种高效能、不可逆性单胺氧化酶-B选择性抑制剂。可用于早起单独治疗PD或用于晚期患者辅助左旋多巴治疗。与其他抗帕金森病药物有所不同的是,雷沙吉兰在提高多巴胺神经递质的同时,具有保护多巴胺能神经元做用。大量研究认为其神经元保护作用可能通过以下机制:1)稳定线粒体膜电位;2)诱导抗凋亡基因表达如Bcl-2及下调促凋亡基因表达如Bax、Bad;3)诱导神经营养因子BDNF及GDNF表达;4)调节淀粉样前蛋白的酶解加工过程;5)通过激活NF-κB系统抗凋亡。以及其他尚未明确的作用位点及作用机制。
目的:
探讨BAG家族蛋白是否参与到雷沙吉兰对多巴胺能神经元的保护作用的机制中。
方法:
1、运用western-blot、免疫荧光技术检测MPTP损伤诱导的PD小鼠模型中BAG1、BAG2、BAG3及BAG5蛋白的变化。
2、雷沙吉兰干预MPTP损伤诱导帕金森动物模型后,运用western-blot、免疫荧光技术检测雷沙吉兰干预后小鼠黑质区多巴胺能神经元内BAG2及BAG5蛋白的变化。
结果:
1、在MPTP损伤诱导的PD小鼠模型中,运用尼氏染色发现PD模型组小鼠黑质区神经元较对照组减少;western-blot检测发现PD组小鼠黑质区多巴胺能神经元中BAG2及BAG5蛋白胶对照组表达增加,BAG1、BAG3蛋白无明显变化;免疫荧光检测发现PD组小鼠黑质区多巴胺能神经元BAG2及BAG5染色阳性细胞数较对照组增多。
2、雷沙吉兰干预MPTP损伤诱导PD小鼠模型后运用western-blot检测发现给予雷沙吉兰干预组较对照组小鼠黑质去多巴胺能神经元中BAG2及BAG5蛋白表达增加,免疫荧光检测发现雷沙吉兰干预组小鼠黑质去BAG2及BAG5染色阳性细胞数较对照组明显增多。
结论:
1、BAG2及BAG5蛋白参与了PD的发病过程。
2、雷沙吉兰在保护多巴胺能神经元的过程中上调BAG2及BAG5蛋白。