鹿茸多肽提取分离纯化及免疫活性的初步研究

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鹿茸是绝大多数雄性鹿科动物所生长的一种尚未骨化的幼角,作为中药在我国已有两千多年的历史。鹿茸作为一种特殊的软骨组织,是一个天然的富含多种活性因子的细胞因子库,在其自体生长过程中,成骨、造血、神经生长、纤维细胞、上皮细胞生长同步进行、作为鹿体最活跃的生长点在其骨化之前贮存大量的生长因子,它们是鹿茸临床作用的生物化学基础,现代医学研究表明鹿茸具有广泛的药理学活性。但是鹿茸的促生长、促代谢、抗炎、免疫调节、健脑益智、抗衰老、生血、促进伤口及骨折愈合的药理作用是目前已知化学成分所无法解释的。因此,对鹿茸富含调控上述各器官组织发育成长的各种多肽类细胞生长因子的研究是十分有意义的。随着国家对中药现代化的逐步重视,我们选择了鹿茸多肽对细胞免疫的调节作用进行了研究。一、鹿茸多肽的提取分离纯化和含量测定鹿茸干片,小心切去边缘绒毛,加入70%乙醇,4℃浸泡48小时,16000RPM高速离心取上清液。经Superdex-75凝胶低压层析,20%乙醇洗脱,在280nm紫外光谱下可见6个独立的蛋白质吸收峰,分批收集洗脱液,得到6个组分,分别为标注为组分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ。二、鹿茸多肽对小白鼠免疫功能的影响本研究观察了鹿茸多肽不同组分对小鼠外周血血清白介素-2含量、脾脏T淋巴细胞增殖反应、脾脏NK细胞杀伤活性和腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响,并尝试衡量鹿茸多肽的免疫活性作用。结果显示:组分Ⅲ、Ⅳ和混合多肽组可以显著提高小鼠外周血中IL-2的含量、在体内应用能极显著协同ConA刺激脾脏淋巴细胞增殖以及可以显著提高小白鼠脾脏NK细胞的杀伤活性,并且达到了差异极显著的水平(p<0.01),活性最强的是组分Ⅳ,但是组分Ⅳ与组分Ⅲ和粗提物之间差异不显著(p>0.05);通过腹腔巨噬细胞吞噬中性红实验可知,组分Ⅲ、Ⅳ和粗提物可以显著提高小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能(p<0.01),活性最强的是粗提物,但是粗提物与组分Ⅲ和Ⅳ之间差异不显著(p>0.05)。在不同剂量鹿茸多肽对小鼠免疫功能影响的实验中发现存在剂量与免疫调节作用存在一定的相关关系,即随着浓度的增加作用效果增强,但是统计结果差异不显著。
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