论文部分内容阅读
目的:建立外周血T淋巴细胞TCR亚家族检测方法,研究TCR亚家族检测的临床意义,并在此基础上探讨有效的中药复方可能的作用机制。方法:根据抗原-抗体特异性结合的基本免疫学原理,利用多重抗体荧光染色技术,通过流式细胞仪检测分析CD3、CD4、CD8、CD95、CD69、TCR、Annexin V等标志性抗体的光电信号强度,建立设门策略,对外周血中的淋巴细胞进行检测分析。通过不同的临床分组,对该方法所检指标的临床意义进行讨论。在此基础上对确有疗效的中药复方的可能作用机制进行研究。结果:1正常人群外周血中T淋巴细胞各TCR亚家族细胞所占比例不同,但各群细胞都可被检测。2正常人群外周血中,与Annexin V分子结合的T淋巴细胞中CD95-D69-T所占比例最高。3类风湿关节炎的患者,外周血T淋巴细胞TCR亚家族中Vβ12、Vβ20及CD4-Vβ9亚家族细胞所占比例与正常人群相比差异明显(P<0.05),与系统性红斑狼疮患者相比CD8+Vβ14、C8-Vβ4所占比例与正常人群相比差异明显(P<0.05);外周血T淋巴细胞中,CD95+T细胞、CD69-T细胞所占比例与正常人群相比无明显差异(P>0.05),与系统性红斑狼疮患者相比差异明显(P>0.05)。4不同病程阶段的类风湿关节炎患者外周T血淋巴细胞TCR亚家族中,Vβ12亚家族细胞所占比例差异明显(P<0.05)。5中药复方治疗前后,类风湿关节炎患者外周血T淋巴细胞TCR亚家族中,Vβ7.1-、Vβ18、Vβ8、Vβ14等亚家族所占比例的变化差异明显(P<0.05);外周血淋巴细胞中,与Annexin V分子结合的T淋巴细胞中CD95+CD69+T所占比例及CD95+T细胞中结合Annexin V分子的细胞所占比例变化差异明显(P<0.05)。结论:1正常人群外周血中T淋巴细胞各TCR亚家族均有分布。2正常人群中,Fas途径诱导的细胞凋亡是T淋巴细胞发生凋亡的主要机制。3不同疾病,外周血中T淋巴细胞各TCR亚家族的分布不同,Vβ12、Vβ20、 CD4+Vβ9可能是类风湿关节炎中出现的相对特异性细胞亚家族。4类风湿关节炎的不同病程阶段,外周血中T淋巴细胞各TCR亚家族的分布不同,Vβ12及CD4+Vβ9在外周血中的比例变化可以作为判断RA缓解情况的指标。5中药复方可能通过增加CD95+T细胞的数量,降低异常增多的CD69+T细胞数量,活化Fas途径等方式调节淋巴细胞中凋亡细胞的数量,改变TCR各亚家族的分布,从而达到治疗类风湿关节炎的目的。中药复方的这种调节作用可能具有双向性。