甘草甜素对人颊黏膜成纤维细胞炎症反应的初步研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:simon20088
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目的:(1)通过组织块法体外培养人颊黏膜成纤维细胞(HBMPs)建立细胞模型,为后续研究提供实验基础。(2)①观察不同浓度甘草甜素对人颊黏膜成纤维细胞增殖的影响。②通过脂多糖(LPS)刺激建立人颊黏膜成纤维细胞的细胞炎症模型,同时加入甘草甜素进行干预,观察白细胞介素-6(IL-6)的浓度,来探讨甘草甜素对人颊黏膜成纤维细胞炎症反应的作用。方法:(1)取OLP患者的正常颊黏膜,组织块法培养人颊黏膜成纤维细胞,经过传代、分离、纯化,取第四代细胞进行免疫组织化学染色,证明所得细胞为HBMFs。(2)①取生长良好的颊黏膜成纤维细胞,加入0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、150μg/ml、200μg/ml的甘草甜素,培养24h、48h、72h后,经MTT法检测每孔的光密度值(OD)。②第4代成纤维细胞为对照组、加入脂多糖为炎症组、同时加入脂多糖和甘草甜素为实验组,用ELISA法分别检测三组IL-6的浓度。结果:(1)通过组织块法培养的人颊黏膜成纤维细胞,经传代、分离、纯化至第四代,得到纯度高、活性好的HBMPs。倒置显微镜下观察,细胞呈长梭形或者星形,细胞核清晰,圆形或椭圆形居中,胞浆丰富。细胞密度高时交织排列成“网状”或者“束状”。免疫组织化学法显示细胞抗角蛋白染色阴性,抗波形蛋白染色阳性。(2)①MTT法结果:与0μg/ml对照组比较,除了25μg/ml组在24h时间段内差异无统计学意义,其余各组在各时段差异均有统计学意义。甘草甜素对人颊黏膜成纤维细胞的生长有抑制作用,在一定范围内随药物浓度增加和作用时间延长而增强,具有明显的时间和剂量依赖性。②ELISA法结果:对照组有微量的IL-6产生,炎症组分泌IL-6明显高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。实验组IL-6分泌量明显低于炎症组,差异有显著性(P<0.05)。结论:(1)人颊部固有层的主要细胞为成纤维细胞,组织块法培养颊黏膜成纤维细胞为后续实验提供细胞模型。(2)①甘草甜素对人颊黏膜成纤维细胞的生长有抑制作用。②人颊黏膜成纤维细胞经过脂多糖促炎,炎症因子IL-6释放增多,体外模拟口腔扁平苔藓(OLP)的炎症状态。加入甘草甜素进行干预,IL-6的释放显著降低,说明甘草甜素在治疗口腔扁平苔藓的炎症反应中有重要作用,为临床治疗口腔扁平苔藓提供理论依据。
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