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目的：本课题旨在观察磁性纳米四氧化三铁颗粒[magnetic nanoparticle of Fe3O4，MNP（Fe3O4）]对藤黄酸（gambogic acid，GA）诱导的K562和U937白血病细胞凋亡效应的影响，并通过测定Bcl-2，Bax，Caspase-3，NF-κB和Survivin的转录与表达情况探讨可能的机制，为临床白血病的治疗提供一定的理论依据。
方法（1）应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法分析单独及联合应用MNP（Fe3O4）和GA对K562和U937细胞的细胞毒作用。（2）应用流式细胞术（flow cytometry，FCM）分别检测单独及联合应用MNP（Fe3O4）和GA后K562和U937细胞的凋亡率。（3）采用普通光学显微镜和荧光显微镜观察药物作用前后K562和U937细胞的形态特征。（4）采用实时定量逆转录聚合酶链反应（real time reverse transcript polymerase chain reaction，Real time RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（western blot，WB）检测药物作用前后Bcl-2，Bax，Caspase-3，NF-κB和Survivin的mRNA和蛋白水平。
结果（1）MTT结果显示：①GA对K562和U937细胞的抑制作用有浓度和时间依赖性，作用48h的IC50值分别为1.13mg/L和0.41mg/L；②20mg/L浓度以下的MNP（Fe3O4）对U937细胞无明显生长抑制作用，与空白对照组相比差异无统计学意义（p>0.05）；③GA与5～20mg/L MNP（Fe3O4）联合应用后，K562和U937细胞的生长较单用GA不同程度受抑，差异有统计学意义（p<0.05），其中GA与10mg/L MNP（Fe3O4）联合应用使K562和U937细胞48h的IC50值分别降为0.72mg/L和0.23mg/L。（2）流式结果表明：①单用MNP（Fe3O4）时K562和U937细胞凋亡率分别为7.1％±3.23％和6.2％±1.7％，较空白对照组（6.1％±1.67％和5.03％±0.13％）差异无统计学意义（p>0.05）；②GA单用及联合MNP（Fe3O4）应用时K562细胞的凋亡率分别为35.2％±3.37％及48.7％±1.47％，两组间差异有统计学意义（p<0.05）；③GA单用及联合MNP（Fe3O4）应用时U937细胞的凋亡率分别为35.05％±3.25％及54.25％±2.45％，两组间差异有统计学意义（p<0.05）。（3）小剂量GA（0.6mg/L、0.2mg/L）分别联合10mg/L MNP（Fe3O4）作用于K562和U937细胞48h后，光镜下均可见细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡形态改变，荧光显微镜下均可见大量细胞染色质高度浓聚并边缘化、核碎裂、碎片状非均质荧光增强等凋亡细胞核荧光改变；而大剂量GA（6mg/L）单独作用于K562和U937细胞48h后细胞呈现胞体高度肿胀、胞膜破裂、内容物溶解并释放等坏死改变。（3）MNP（Fe3O4）与GA联合作用于K562和U937细胞48h后，Bcl-2、NF-κB和Survivin mRNA和蛋白水平明显下调，Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白水平明显上调，与单用GA相比差异有统计学意义（p<0.05）。
结论（1）MNP（Fe3O4）单独处理K562和U937细胞对细胞正常生长、明显影响，且不能有效促进K562和U937细胞凋亡；（2）GA与MNP（Fe3O4）联合应用后可发挥更大的细胞毒作用；（3）MNP（Fe3O4）能增强GA诱导K562和U937细胞凋亡的效应；（4）MNP（Fe3O4）与GA联合处理K562和U937细胞48h后，细胞出现典型的凋亡特征，不同于大剂量化疗导致的肿瘤细胞坏死；（5）GA联合MNP（Fe3O4）诱导K562和U937凋亡可能与Bax和Caspase-3转录与表达上调，Bcl-2、NF-κB和Survivin转录与表达下调有关。