研究背景与目的：　　糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain，DNP)由于易引起自发痛、痛觉过敏甚至痛觉超敏等异常疼痛症状，对患者生活质量带来极大影响。目前，糖尿病导致周围神经病变的发病机制尚不清楚，有不少学者认为与中枢敏化有关。中枢敏化时，交感神经节后纤维发生芽生现象，与背根神经节形成“交感-感觉偶联”，使得交感神经末梢和背根神经节神经元胞体之间形成直接和间接的类似于突触的功能性结构。有研究证实糖尿病大鼠变性及再生的Aδ和C纤维及交感神经芽枝上的α2肾上腺素能受体都具有高度的敏感性，当交感神经节后纤维兴奋时，交感神经末梢释放出去甲肾上腺素并作用于α2肾上腺素能受体，激活背根神经节传入神经元，使其产生敏感化和兴奋的改变，从而引起痛觉过敏、痛觉超敏等症状。也有学者认为糖尿病神经病理性疼痛的出现与离子通道活性改变有关。当外周神经发生损伤时，背根神经节和轴突细胞电压门控 K+,Na+,Ca2+等离子通道的表达及功能也发生改变，可导致自发性的异位神经放电及痛性神经病变，并且，大量研究表明神经病理性疼痛产生和维持的重要机制之一是神经异位放电。　　G蛋白偶联内向整流钾通道(GIRK)是7个内向整流钾通道亚家族中的一员，由5个亚单元组成，其中GIRK1～4亚单元已经在哺乳动物细胞中发现，GIRK5亚单元也在爪蟾卵母细胞中发现。在中枢神经系统（Central Nervous System,CNS），GIRK通道能与许多G蛋白偶联受体结合，如α2肾上腺素能受体、多巴胺能受体、毒菌碱受体、γ-氨基丁酸（Gamma-aminobutyric acid,GABA）受体等相结合。生物体内，GIRK以同源及异源多聚体的形式存在，受G蛋白调节，可直接与Gβγ结合并被激活，已证实可扩散的 GIRK蛋白的 GIRK1-4亚单位与Gβγ的N及 C末端直接结合。GIRK具有调节神经细胞兴奋性，静息电位，神经递质释放，起慢突触后抑制的作用，其在疼痛的调节中发挥着重要作用。并且，内啡肽等内源性疼痛调节物质和一些镇痛药物均能激活GIRK通道，激活的GIRK通道抑制神经元的冲动发放，发挥着减弱疼痛信号的传导的作用。　　右美托咪定是一种高效、高选择性α2肾上腺素能受体激动药。可完全激活α2B-AR，部分激活α2A-AR和α2C-AR。与可乐定相比，右美托咪定与α2-AR、α1-AR结合的比例为1620：1，远高于可乐定的300：1。右美托咪定能激活α2A-AR产生镇痛、镇静、抑制交感活性等作用。在一项治疗大鼠急性痛和神经病理性疼痛的研究中发现，右美托咪定对这两种不同的疼痛均可产生镇痛作用，并随剂量的增大而增强。　　目前，单次鞘内注射右美托咪定对糖尿病神经病理性疼痛大鼠背根神经节GIRK1表达的影响仍未见报道。因而，本实验拟建立糖尿病神经病理性疼痛大鼠模型，采用单次鞘内注射右美托咪啶的方法，观察右美托咪啶对糖尿病神经病理性疼痛大鼠机械痛阈及背根神经节GIRK1表达的影响，评价右美托咪定对糖尿病神经病理性疼痛所产生的抗伤害效应及其可能存在的镇痛机制，为开展临床研究及应用提供理论依据。　　方法：　　8-10周成年雄性SD大鼠100只，体重在200-220g之间，清洁级，由广东省实验动物中心提供。造模前两天，测大鼠双侧后足基础50％机械缩足阈值(50%MWT)。禁食12小时，于造模当天测量大鼠体重，空腹血糖值。随机选取大鼠60只单次腹腔注射链脲佐菌素（STZ）60 mg/kg，2周后，选取血糖值大于300mg/dL，且双侧后足50%机械缩足阈值（50%MWT）小于4g者为DNP模型成功。余下大鼠40只为对照组，按2.8ml/kg的剂量腹腔注射枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液。从DNP大鼠中随机选取39只，分为D-D组（n=24，DNP大鼠鞘内注射右美托咪定1.5ug/Kg）、D-C组（n=15，DNP大鼠鞘内注射等容量生理盐水）；从对照组大鼠中随机选取39只，分为H-D组（n=24，大鼠鞘内注射右旋美托咪定1.5ug/Kg）、H-C组（n=15，大鼠鞘内注射容量的生理盐水）。采用von frey细丝法测大鼠造模前、造模后14天机械痛阈，以及鞘内注射后0.5h、1h、2h、4h、6h、24h的机械痛阈。采用免疫荧光法测定大鼠背根神经节 GIRK1蛋白表达阳性细胞计数，Western blot法检测GIRK1蛋白的表达。　　结果：　　1．造模后大鼠生理和活动的改变四组大鼠基础血糖值无明显差异（P＞0.05）。H-D组和H-C组大鼠接受腹腔注射后每日饮食尿量正常，性格温顺，第十四天毛色光滑柔软，体重正常，血糖值较基础血糖值无明显变化（P＞0.05）；而D-D组和D-C组大鼠则血糖值明显升高（P＜0.05）,表现出明显的糖尿病症状：毛发稀少，毛色暗淡，身形消瘦，体重减轻，每日饮食饮水及尿量均明显增多，性格暴躁。H-D组和D-D组大鼠在鞘内注射右旋美托咪啶后30min内有轻微嗜睡现象，但可轻易唤醒，唤醒后活动无明显障碍。　　2．机械疼痛阈值的变化造模前四组大鼠基础50%MWT差异无无统计学意义（P>0.05）。D-D组与D-C组腹腔注射STZ14天后的50%MWT较基础50%MWT均明显降低（P<0.05）。与H-D组及H-C组比较，D-D组与D-C组腹腔注射STZ14天后的50%MWT均明显降低（P<0.05）。D-D组在鞘内注射后0.5h、1h、2h、4h、6h各时间点50%MWT较D-C组明显增高（P<0.05），但在24h时两组50%MWT差异无统计学意义（P>0.05）。H-D组在鞘内注射后0.5h、1h、2h、4h、6h各时间点50%MWT较 H-C组明显增高（P<0.05），在24h时两组50%MWT差异无统计学意义（P>0.05）。在0.5h、1h、2h、4h、6h各时间点H-D组与D-D组50%MWT均较腹腔注射14天后的50%MWT明显增高（P<0.05），但两组在对应时间点的差异无统计学意义（P>0.05）。　　3．脊髓背根神经节GIRK1蛋白表达阳性细胞计数比较在DNP模型大鼠，D-D组在鞘内注射后2h、4h、6h的GIRK1表达阳性细胞数较D-C组明显增加（P<0.05）。在缓冲剂对照组模型，H-D组在鞘内注射后2h、4h、6h的 GIRK1表达阳性细胞数较H-C组明显增加（P<0.05）。而且，在2h、4h、6h各时间点，D-D的GIRK1表达阳性细胞数较H-D组均有升高（P<0.05）。　　4．脊髓背根神经节GIRK1蛋白表达水平比较以GAPDH的IOD值作为内参对照值，对两组条带进行IOD值的大小进行比较。GAPDH的分子量为36KD，GIRK1的分子量为56KD。D-D组与H-D组均有GIRK1蛋白表达。与H-D组比较，D-D组在鞘内注射右旋美托咪啶2h、4h、6h后GIRK1的表达均增加，差异有统计学意义（P<0.05）。　　结论：　　1.单次鞘内注射右美托咪定1.5ug/kg，能提高糖尿病神经病理性疼痛大鼠的机械痛阈值，减轻大鼠的疼痛反应。　　2.单次鞘内注射右美托咪定1.5ug/kg，能增加糖尿病神经病理性疼痛大鼠背根神经节GIRK1蛋白的表达水平，提示右美托咪定的镇痛作用可能与通过上调GIRK1蛋白的表达有关。