论文部分内容阅读
维生素D对细胞分化、功能及存活有重要的作用。在骨骼中,维生素D刺激骨更新,同时阻止成骨细胞(osteoblast, OB)免于凋亡;在肌肉中,维生素D维持Ⅱ型纤维功能,保持肌肉的强度。OB是骨形成的主要功能细胞,负责骨基质的合成、分泌和矿化。体外分离培养OB是毒理学、药理学、生理学及基因工程等研究的基础。高纯度、活力强的OB是进行研究的前提。本文从乳鼠颅骨OB的分离培养开始,采用第2～5代的OB,研究了维生素D3注射液对体外培养OB功能的影响,此外,还通过注射的方法,观察了维生素D3注射液对乌骨鸡产蛋率的影响。为维生素D在临床应用的剂量选择,提供了一定的理论依据。1成骨细胞的培养与鉴定为研究各种因子对骨代谢性疾病影响的细胞水平机制,建立了体外大鼠颅骨OB分离培养的方法。采用胰酶、胶原酶两步消化法获得大鼠颅骨OB,多次低速离心纯化OB,80%融合后传代。倒置显微镜下观察OB的形态及生长情况,碱性磷酸酶(ALP)和茜素红矿化结节染色特异性鉴定OB ,MTT法测定OB增殖情况。结果,本方法分离的OB生长状态良好,纯度较高,能满足一般试验的需要。2维生素D3注射液对成骨细胞功能的影响为观察维生素D3对体外培养大鼠OB增殖和功能的影响,在体外分离培养新生大鼠颅盖骨OB的基础上,添加了不同浓度的维生素D3注射液(0,10-10、10-9、10-8 mol/L)。MTT法测定OB增殖情况,PNPP法测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,改良von Kossa染色计数矿化结节。结果,10-9、10-8 mol/L维生素D3注射液作用前3 d较对照组显著或极显著促进OB增殖(P<0.05或P<0.01),随时间延长,各浓度维生素D3注射液对OB增殖作用转为抑制,但差异不明显(P>0.05)。各浓度维生素D3注射液作用5、9 d均显著或极显著促进ALP活性(P<0.05或P<0.01)。10-10、10-9 mol/ L能显著促进钙化结节的形成(P<0.05),而10-9、10- 8 mol/ L显著或极显著增加矿化结节体积(P<0.05或P<0.01)。说明,维生素D3注射液可以促进OB的成骨能力,10-9 mol/ L浓度较合适。3维生素D3注射液对乌骨鸡产蛋率的影响通过对乌骨种鸡注射不同剂量的维生素D3(1000 IU、2000 IU、4000 IU/只),研究维生素D对产蛋率及血浆钙磷含量的影响。结果表明,在整个试验期间,对照组产蛋率保持稳定,1000 IU剂量组产蛋率呈上升趋势,4000 IU剂量组产蛋率呈下降趋势。与对照组相比,1000 IU组血浆钙含量显著升高(P<0.05),各试验组血浆磷含量均显著高于对照组(P<0.05);4000 IU组与对照组间血浆钙磷比例差异显著(P<0.05)。表明肌肉注射1000 IU维生素D3能提高乌鸡血浆钙磷含量和产蛋率。