【摘 要】
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鸽是典型的单态性鸟,通过简单外貌特征很难区分其性别,这给鸽育种、养殖带来很大的困难。目前鸽性别鉴定主要依靠有经验的养殖人员肉眼区分,这种方法准确率不高,不适合应用于早期幼鸽的性别判定。本研究主要通过提取鸽血液、羽毛样品基因组DNA,分别进行PCR反应、LAMP反应、双重LAMP反应判定性别,并对部分鸽进行解剖观察性腺器官验证结果的准确性,建立早期幼鸽PCR反应、LAMP反应、双重LAMP反应性别鉴
【基金项目】
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自治区重点研发计划项目“肉鸽高产品系培育”（项目编号:2020B01007-1）的部分研究成果课题主持人:王旭光 副教授（新疆农业大学）；
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鸽是典型的单态性鸟,通过简单外貌特征很难区分其性别,这给鸽育种、养殖带来很大的困难。目前鸽性别鉴定主要依靠有经验的养殖人员肉眼区分,这种方法准确率不高,不适合应用于早期幼鸽的性别判定。本研究主要通过提取鸽血液、羽毛样品基因组DNA,分别进行PCR反应、LAMP反应、双重LAMP反应判定性别,并对部分鸽进行解剖观察性腺器官验证结果的准确性,建立早期幼鸽PCR反应、LAMP反应、双重LAMP反应性别鉴定体系,为解决幼鸽性别鉴定困难提供方法。研究结果如下:1、建立了早期幼鸽PCR反应性别鉴定体系。试验一:以65只成年鸽血液样品基因组DNA模板为对照组,羽毛样品提取的基因组DNA为试验组,依据CHD1基因特异性进行PCR性别鉴定建立一种快速提取羽毛样品基因组DNA及性别鉴定的方法,同一个体血液样品基因组DNA与羽毛样品基因组DNA扩增结果相同,雄性样品可扩增出一条446 bp的条带,雌性样品可扩增出326 bp和446 bp的两条条带,PCR性别鉴定结果与性腺器官观察结果一致;试验二:以优化好的羽毛提取方案及PCR性别鉴定体系为基础,对100只已知性别,200只未知性别的早期幼鸽进行性别鉴定,结果显示:100只已知性别幼鸽羽毛样品基因组DNA检出率为100%,与性腺器官观察结果一致率为98%,200只未知性别幼鸽羽毛样品基因组DNA检出率为90%;试验三:进行重复验证,通过提取羽毛样品基因组DNA,对3000只鸽进行PCR反应性别鉴定,检出率为90.4%。2、建立了早期幼鸽LAMP反应性别鉴定体系。试验一:以成年鸽血液基因组DNA为模板,设计LAMP反应引物,利用引物GAPDH、Sex分别进行扩增,并对反应条件进行优化,确定了引物最适退火温度为62℃,最适反应时间为45 min,同一个体LAMP反应扩增结果与PCR反应结果一致;试验二:通过添加1μL 1000×SYBR GreenⅠ核酸染料优化检测方式,建立可视化LAMP性别鉴定反应体系;试验三:进行重复验证,对100只已知性别幼鸽羽毛样品基因组DNA进行可视化LAMP反应性别鉴定,检出率为97%,同一个体可视化LAMP反应扩增结果与PCR反应结果、性腺器官观察结果一致率均为90.7%。3、建立了早期幼鸽双重LAMP反应性别鉴定体系。试验一:以成年鸽血液基因组DNA为模板,利用荧光标记的引物GAPDH、Sex分别进行扩增验证了荧光标记引物的有效性;试验二:利用荧光标记引物GAPDH、Sex进行双重LAMP反应,对反应条件进行优化,确定了引物最适浓度比为1:3,最适PEI浓度为1 mol/L;试验三:进行重复验证,对100只已知性别幼鸽羽毛样品基因组DNA进行双重LAMP反应性别鉴定,检出率为98%,同一个体双重LAMP反应扩增结果与PCR反应结果一致率为94.9%,与性腺器官观察结果一致率为96.9%。综上所述,本研究建立了3种用于幼鸽性别鉴定的方法,双重LAMP反应与LAMP反应相比具有较高的检出率和准确性,为现场快速鉴定幼鸽性别提供了方法,具有良好的应用前景。
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