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背景甲状腺癌是最常见的内分泌系统恶性肿瘤,其发病率在过去10年迅速上升。其中,乳头状甲状腺癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)是最常见的甲状腺癌病理类型,其属于一种分化型甲状腺癌。甲状腺癌的发生和发展是一个涉及多种因素、多种基因和多种信号通路的复杂过程。因此,探讨甲状腺癌生物学行为的分子机制,对进一步提高甲状腺癌患者的治愈率与生存率具有重大意义。CITED1(Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 1,also known as MSG1)属于转录共激活因子家族。近年来相关研究表明,甲状腺癌、黑色素瘤、Wilms瘤、成肝细胞瘤及其他肿瘤中CITED1表达异常,与肿瘤发生和发展密切相关,表明CITED1可能发挥着类似癌基因的作用。目的本研究将通过体内外实验明确CITED1对甲状腺乳头状癌生物学行为的影响,并探讨其是否通过Wnt/β-catenin信号通路引起上述一系列过程,为甲状腺乳头状癌的早期诊断及治疗提供新的思路。方法(1)分别用real-time PCR和western blot方法检测三种甲状腺乳头状癌细胞株K1,BCPAP,TPC-1和正常甲状腺组织细胞Nthy-ori 3–1中的CITED1 mRNA和蛋白表达水平,从中选取CITED1表达水平最高的甲状腺乳头状癌细胞进行下一步实验。(2)分别用CITED1-shRNA及其阴性对照NC-shRNA的重组慢病毒感染K1细胞,采用real-time PCR和western blot方法检测CITED1基因沉默效率;然后采用CCK-8法检测细胞增殖,FCM法检测细胞周期和细胞凋亡,细胞划痕愈合实验和transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;最后通过western blot方法检测沉默CITED1表达后β-catenin、c-myc和cyclinD1蛋白表达变化。(3)在裸鼠皮下接种K1细胞,建立裸鼠移植瘤模型,观察小鼠肿瘤形成情况。每3 d测量裸鼠移植瘤长度及宽度,计算移植瘤体积。于27 d后处死裸鼠并取出完整的移植瘤组织,称取瘤重,并用western blot方法检测移植瘤中β-catenin、c-myc和cyclinD1蛋白表达水平。结果(1)CITED1在甲状腺癌细胞中的表达明显高于正常甲状腺组织细胞,但CITED1在K1细胞中的相对表达高于BCPAP,TPC-1细胞,因此将K1细胞用作后续实验所需细胞。(2)经携带CITED1-shRNA的重组慢病毒感染后,甲状腺乳头状癌K1细胞中CITED1 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低,证明成功获得了CITED1基因沉默的K1细胞株。沉默CITED1基因表达后,K1细胞的增殖能力显著降低,细胞凋亡率明显增加,G 0/G 1期细胞比例明显增高,G 2/M及S期细胞比例降低,划痕实验表明细胞迁移能力明显减弱,而且transwell实验表明细胞迁移和侵袭能力均减低;western blot实验检测到沉默CITED1的表达可以增加β-catenin、c-myc和cyclinD1蛋白表达。(3)裸鼠成瘤实验表明,CITED1-shRNA组裸鼠移植瘤生长速度缓慢,移植瘤体积和重量均明显减小。western blot实验结果和体外实验结果一致,CITED1-shRNA组裸鼠移植瘤β-catenin、c-myc和cyclinD1蛋白表达水平均增加。结论(1)CITED1在PTC细胞中的表达相对于正常甲状腺组织细胞更高。(2)CITED1可以促进PTC生长、侵袭和迁移,且抑制其凋亡。(3)CITED1通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来促进PTC的发生发展。